化脓性疾病是圈养林麝主要疾病之一,已有研究表明化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)可能是林麝脓肿病的原发致病菌.随着化脓隐秘杆菌全基因组的测定,对其基因功能研究将是未来工作的重要内容之一.相对荧光定量是基因功能研究中一项重要的实验技术,而内参的选择直接决定着定量结果的准确性.本研究利用RT-qPCR技术对化脓隐秘杆菌7个管家基因16S rDNA、ldh(乳酸脱氢酶)、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、gyrB(DNA促旋酶B亚基)、glk(己糖激酶)、rpoD(RNA聚合酶的σ70因子)和recA在热激、低温、低pH、高盐浓度、乙醇压等处理条件下测定mRNA的表达量,然后使用软件Bestkeeper、geNorm和Normfinder对候选内参的稳定性进行了评估.结果表明,在所有压力条件下最稳定的4个基因是16S rDNA、rpoD、glk、和gyrB,最不稳定的两个基因是GAPDH和ldh.在热激和低温处理条件下最适的内参基因组合是16S rDNA和rpoD；在低pH压力条件下最适内参组合是glk、16S rDNA和rpoD；在高盐浓度压力下最适内参组合是rpoD、recA、和glk；在乙醇压力下最适内参组合是16S rDNA和glk.在此基础上,对化脓隐秘杆菌四个热激蛋白基因(dnaK、grpE、groEL、groE1S)和一个与热激相关的σE因子(rpoE)在上述五种压力胁迫下mRNA转录水平变化进行了研究.结果发现grpE的表达量在五种压力条件下均升高,表明GrpE在化脓隐秘杆菌压力应对中起着至关重要的作用.除grpE外,在热激压力下dnaK的表达量升高,表明DnaK蛋白参与了化脓隐秘杆菌高温压力应对；在低温和高盐压力下rpoE的表达量上调,因此oE因子可能介导这两种胞外压力的感应和传递；在低pH和乙醇压力下仅有grpE升高较明显,可能只有GrpE参与了这两种压力的应对.研究结果为化脓隐秘杆菌功能基因的平研究提供了参考.