【摘 要】
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引言 禽流感、新城疫是严重危害我国养禽业的重要疫病,目前对这两种疾病的防制主要依赖疫苗。本研究在分子流行病学调查及高效反向遗传操作平台基础上,拯救表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组新城疫病毒,以期获得与目前优势流行株匹配的基因Ⅶ型疫苗候选株。材料与方法 BHK-21细胞由本实验室保存；SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。重组病毒感染性克隆的构建：常规方法提取H9亚型禽流感病毒RNA
【机 构】
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吉林大学动物医学学院,长春,130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会
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引言 禽流感、新城疫是严重危害我国养禽业的重要疫病,目前对这两种疾病的防制主要依赖疫苗。本研究在分子流行病学调查及高效反向遗传操作平台基础上,拯救表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组新城疫病毒,以期获得与目前优势流行株匹配的基因Ⅶ型疫苗候选株。材料与方法 BHK-21细胞由本实验室保存；SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。重组病毒感染性克隆的构建：常规方法提取H9亚型禽流感病毒RNA,RT-PCR扩增HA基因胞外区,经Pme Ⅰ酶切插入rNA1致弱株感染性克隆。重组病毒的拯救：将转录质粒pCI-rNA-1及辅助质粒pcDNA-NP、pcDNA-P、pcDNA-L按4∶2∶1∶1充分混合,共转染BHK-21细胞,救获重组病毒。重组病毒的鉴定：经电镜观察、RT-PCR及测序对救获毒株进行鉴定。通过Westernblot及间接免疫荧光检测流感病毒HA蛋白表达情况。
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