【摘 要】
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[目的]探索鳕鱼皮胶原蛋白(APSC)及其3个不同分子量段胶原肽(CPs)(分子量＞6kDa,HCP；6 kDa＞分子量＞3 kDa,MCP；分子量＜3 kDa,LCP),对肠上皮细胞紧密连接屏障功能的保护作用及其潜在机制.[方法]利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,模型分为正常对照组(NC组)、TNF-α阳性对照组(PC组)、胶原蛋白处理组(APSC组)和胶原蛋白肽处理组(CP组),CP
【机 构】
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中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003;美国塔夫茨大学,美国波士顿02111 美国塔
【出 处】
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2016年中国水产学会水产品加工与综合利用分会学术年会
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[目的]探索鳕鱼皮胶原蛋白(APSC)及其3个不同分子量段胶原肽(CPs)(分子量＞6kDa,HCP；6 kDa＞分子量＞3 kDa,MCP；分子量＜3 kDa,LCP),对肠上皮细胞紧密连接屏障功能的保护作用及其潜在机制.[方法]利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,模型分为正常对照组(NC组)、TNF-α阳性对照组(PC组)、胶原蛋白处理组(APSC组)和胶原蛋白肽处理组(CP组),CP组根据分子量大小分为LCP、MCP和HCP 3个亚组.APSC和CP组分别以2 mg/mL浓度预处理24h,24h后PC组、APSC组和CP组分别给予10 ng/mL TNF-α干预24 h.通过Caco-2细胞跨膜电阻值(TEER)的变化,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)的透过率检测Caco-2细胞紧密连接屏障的通透性,酶联免疫法检测Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、occludin,肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(pMLC)以及细胞转录因子NFκB p65和Elk-1的表达.[结果]与NC组相比,PC组细胞通透性增加,TEER降低,紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达水平降低,MLCK的表达和pMLC水平上升,NFκB和ERK1/2通路被激活,所有变化均有统计学差异.与PC组相比,APSC和CP预处理能够显著降低细胞通透性,增加TEER和紧密连接蛋白的表达水平,同时抑制MLCK的表达和pMLC水平的升高,阻断了NFκB和ERK1/2通路的激活.其中,LCP具有最佳的作用效果.[结论]APSC和CPs对Caco-2细胞紧密连接屏障有很好的保护作用,其中由NFκB和ERK1/2活化影响的MLCK-P-MLC通路及对紧密连接蛋白表达的促进可能是其重要的作用机制.
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