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研究目的：为了分析人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞中的分布与定位,研究两蛋白高表达对TNF-α诱导HeLa细胞凋亡的影响.
方法：将质粒pDsRed-Monomer-C1/HPV16 E6或pEGFP-C1/hDaxx转染或共转染HeLa细胞,观察DsRed-HPV16 E6或EGFP-hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中的表达;激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞中的分布,并分析共定位.HPV16 E6与hDaxx真核细胞表达质粒瞬时共转染HeLa细胞,MTT法测定细胞增殖活性;用Hoechst 33258染色细胞核,在荧光显微镜下观察细胞核形态,并对活细胞和凋亡细胞分别计数,计算凋亡率.光显微镜下观察细胞核形态，并对活细胞和凋亡细胞分别计数，计算凋亡率。分别将Oμg, O.5μg, 1.Oμg, 2.OμgpcDNA3.1(-)lhDaxx和2.Oμg pcDNA3.1(-)iHPV 16E6瞬时共转染HeLa细胞，以空细胞组、pcDNA3.1(-)转染组和pcDNA3.1。lbDaxx转染组作为对照，TNF-a处理12h后分别收集各组细胞，经70％的乙醇4℃固定过夜，PI染色后，用流式细胞术检测细胞凋亡。
结果显示：HPV16 E6或hDaxx能在HeLa细胞表达;在激光共聚焦显微镜下，DsRed-HPV 16 E6融合蛋白所发的红色荧光主要分布于胞核，EGFP-hDaxx融合蛋白所发的绿色荧光仅分布于胞核;HPV16 E6和hDaxx共转染组，绿色荧光和红色荧光在胞浆较弱呈均匀分布，在胞核较强且集中分布在核膜附近，红色荧光同绿色荧光融合成黄色荧光。与HPV16 E6转染组比较，HPV16 E6与hDaxx共转染时，细胞增殖活性降低，差异有统计学意义(P<0.05 )。TNF-a处理的各组细胞均可见胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光的凋亡细胞。pcDNA3.10JE6转染组凋亡率低于pcDNA3.1(-)转染组，差异有统计学意义(P<0.05 );与E6转染组相比，共转染组凋亡率显著升高(P<0.01)，且凋亡率随pcDNA3.1(-)/hDaxx转染量的增加而升高。
结论：DsRed-HPV16 E6与EGFP-hDaxx融合蛋白能在HeLa细胞内表达，HPV16 E6使部分hDaxx从细胞核转位至细胞浆，且两者发生共定位。HPV16 E6蛋白抑制TNF-a诱导HeLa细胞凋亡;在表达HPV16 E6蛋白的HeLa细胞，hDaxx高表达通过剂量依赖方式促进TNF-a诱导细胞凋亡。