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建立高效液相色谱法测定甲氧苄啶片的含量及有关物质。方法采用Waters Symmetry C18柱,以0.015mol·L-1磷酸(用三乙胺调pH至3.5)-乙腈(83：17)为流动相检测波长为271nm,流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃。结果甲氧苄啶与其相邻杂质峰能有效分离；甲氧苄啶在16.1～161.3μg·mL-1浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999,n=5)；平均回收率为100.4%。RSD为0.7%(n=9)；检测限为3.8ng,定量限为13.9ng。结论该方法简便、准确、专属；可用于甲氧苄啶片的含量及有关物质的测定。