超高效液相色谱法同时测定柑橘中主要酚酸和类黄酮物质

来源 :第四届中国食品与农产品质量安全检测技术国际论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ching19846
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  [目的]建立了超高效液相色谱快速同时测定柑橘中5种酚酸(香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和芥子酸)和14种类黄酮(圣草枸橼苷、芦丁、圣草枸橼苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮甙、地奥司明、槲皮素、香蜂草甙、柚皮素、橙皮素、甜橙素、川皮苷和桔黄酮)含量的方法.初步探讨了柑橘属五大基本类型中主要类黄酮和酚酸物质种类及含量的变化规律.[方法]首先对上机条件优化,检测波长选择基于全扫描(190~400nm),283nm左右所有物质都有最大吸收光谱;柱温、流动相类型和流速优化参考相关文献,为了能使基线分离,采用梯度洗脱方式;再对柑橘样品处理方法进行优化,对提取剂类型、提取次数和时间进行单因素比较试验;柑橘样品经乙酸乙酯振荡提取30min,果皮和果肉分别提取4次和3次,蒸发浓缩,甲醇定容上机.[结果]19种物质在18 min内基线分离,线性范围为0.01-500mg/L,线性相关系数均在0.999以上,精密度、重复性和稳定性良好(相对标准偏差小于5%).两个水平下加标,果皮回收率为85.8%-109.4%(相对标准偏差为0.86%-6.06%),果肉回收率为88.4%-112.7%(相对标准偏差为1.05%-5.23%),方法检出限为0.001-0.09 mg/kg (S/N=3).采用这种方法对实际样品进行检测,样品包括五大类柑橘:宽皮柑橘类(沙糖橘和椪柑)、甜橙类(纽荷尔脐橙)、柚类葡萄柚类(鸡尾葡萄柚)、枸橼柠檬类(柠檬)和金柑类.不同品种类黄酮和酚酸物质含量和种类差异较大:就总酚类物质而言,桠柑和鸡尾葡萄柚果皮中最高,椪柑是其它品种的1-1.5倍左右、金柑的5倍,果皮为果肉的3-5倍左右;就类黄酮物质而言,鸡尾葡萄柚果皮中总含量最多(1813.22mg/kg),其次是桠柑、纽荷尔脐橙、沙糖橘、柠檬、金柑,果肉总含量变化趋势与果皮一致,果皮明显高于果肉;黄烷酮(圣枸橼苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮甙、香蜂草甙、柚皮芸香甙、柚皮素和橙皮素)是柑橘中主要的类黄酮,鸡尾葡萄柚果皮中最多(1491.8mg/kg),其次是柠檬和纽荷尔脐橙,最少的是金柑,而果肉含量明显低于果皮;就酚酸而言,沙糖橘果皮中最多(515.21mg/kg),其次是椪柑、柠檬、鸡尾葡萄柚和纽荷尔脐橙,金柑最少,果肉中变化趋势与果皮一致,果皮含量为果肉的3-5倍左右;绿原酸,阿魏酸是主要的酚酸.[结论]利用超高效液相色谱仪,建立了同时快速检测柑橘中主要酚酸和类黄酮物质的方法.该方法以ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱(2.1×100mm,1.7 μ m)为分离柱;柱温为35℃;进样量为3.0 μ L;流速为0.3 mL/min;梯度洗脱,以0.3%乙酸水溶液(A)/甲醇(B)为流动相:95-80%(0-3min)A,80-80% (3-8 min)A,80-70% (8-12 min)A,70-20%(12-17 min)A,20-95% (17-20min) A;定量波长为283nm.该方法高效、精确、低耗、环保,并经实际样品(五大类柑橘)验证.不同柑橘品种酚酸和类黄酮物质均有检出,且含量和种类存在明显差异,表明该方法适合柑橘水果中多种主要酚酸和类黄酮含量的同时快速测定,可作为柑橘样品中酚酸和类黄酮同时检测的常规分析方法.
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