【目的】本研究采用MTT比色法,观察黄芪多糖提取物对小鼠、鸡、蛇三种动物脾细胞的影响,探索蛇脾细胞体外培养条件,为蛇类疾病研究或产品研发奠定基础。【方法】选取健康的5周龄昆明小鼠、1月龄凤翔公鸡、6月龄王锦蛇,处死后无菌采取脾脏,常规方法处理制备脾细胞悬液,调整脾细胞浓度为2×10⁶/mL。用10%FBS-RMIP1640培养液配制32mg/mL黄芪多糖提取物溶液,过滤除菌,依次倍比稀释为8个浓度,备用。取96孔板,每孔分别加入90μl脾细胞悬液,第1孔为阴性对照组,8个平行,加入10μl 10%FBS-RMIP1640培养液,第2孔为阳性对照组,8个平行,加入10μLConA溶液（400μg/m1）,第3孔至第10孔为实验组,每个浓度8个平行,加入不同浓度的黄芪多糖提取物溶液10μL,使黄芪多糖提取物的终浓度分别为3200μg/ml,1600μg/ml,800μg/ml,400μg/ml,200μg/ml,100μg/ml,50μg/ml,25μg/ml,混匀,置CO₂培养箱37℃恒温培养20h,每孔加入10μL MTT（5mg/mL）,继续培养4h,离心5min,弃上清,分别加入DMSO 100μL混匀,测定OD₄₉₀值。试验数据用SPSS 18.0软件进行分析。【结果】1、在本试验中,小鼠和鸡脾细胞在黄芪多糖提取物终浓度为50μg/ml,25μg/ml时,促进效果与ConA阳性对照组持平,在100-3200μg/ml时,促进效果显著;蛇脾细胞在各浓度实验组促进效果均显著;2、在阴性对照组中,通过用酶联免疫测定仪测定OD₄₉₀值可以得到:在上述三种动物中,蛇脾细胞活性最好,其次为鸡脾细胞,最后为小鼠脾细胞。【结论】各浓度的黄芪多糖提取物均可以增强蛇脾细胞的活性,且在高浓度时对蛇脾细胞的活性促进最为显著;而黄芪多糖提取物在低浓度时对小鼠和鸡脾细胞影响不显著,在中高浓度时对其活性有显著促进。蛇为冷血动物,其脾细胞的体外培养条件为5%CO₂、30.5℃,这与小鼠、鸡有一定差别。这一实验为针对蛇临床的下一步研究提供了实验基础。