siRNA系列表达载体的构建及其应用

来源 :2003年全国生化与生物技术药物学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xujingtony
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RNAi是一种新兴的抑制基因表达的技术.常用的产生siRNA的方法是体内转录法.本实验分别构建了人U6、鼠U6和人H1启动子载体,并构建了具有筛选标记和指示作用的siRNA表达载体.在针对乙酰肝素酶(heparanase)基因的RNAi实验中,证明我们所构建的载体是有效的.
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目的:探讨将人核糖核酸酶抑制因子(RI)基因转染到C57/BL纯系小鼠骨髓造血细胞中使其过表达,从而通过抑制血管生长因子(Ang)的活性来抑制肿瘤血管生成达到抑制肿瘤的生长的可行性.方法:用逆转录病毒感染小鼠骨髓造血细胞,体外分析病毒的转染效率;将阳性细胞移植给致死剂量钴60照射的小鼠体内,观察移植的细胞在体内表达情况和对小鼠黑色素瘤生长情况的影响.结果:体外逆转录病毒对小鼠骨髓造血细胞的转染效率
白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)是由抗原呈递细胞产生的、具有多种免疫调节作用的细胞因子.IL-12最主要活性是诱导自然杀伤细胞(NK细胞)和T细胞产生γ-干扰素(IFN-γ),增加NK细胞的杀伤能力以及细胞毒T细胞的特异性细胞毒活性.IL-12可作为治疗药物以内原性抗原的佐剂形式促进肿瘤或病毒特异性免疫,抑制肿瘤生长或治疗病毒感染.如果作为外原性抗原的佐剂,IL-12可
目的:构建艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)的融合基因表达质粒,观察其在痘苗病毒中共表达结果,研究其意义.方法:利用基因重组技术,将IFNα-2b基因片段插入到env基因的nt8383位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选,挑出重组痘苗病毒.经免疫荧光、Western blot和Dot-ELISSA鉴定表达产物.如果:间接免疫荧光实验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光.
目前,以大肠杆菌为宿主的表达体系是外源蛋白的首选体系,其遗传背景清楚,繁殖快,成本低表达量高,易于操作.本文重点对真核基因在大肠杆菌细胞非融合可溶性高效表达进行了研究.
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目的:研究二硫化二砷(AsS)诱导K562细胞发生G2/M期阻滞及其可能机制.方法:不同浓度AsS处理K562细胞后于不同时相收集细胞,流式细胞术(FACS)测细胞周期改变,Western blotting检测细胞周期相关蛋白cyclinB、CDK1、p-CDK1、cdc25c、P27,RT-PCR检测cyclin B mRNA变化.结果:5μmol/LAsS8h即可诱导K562细胞发生G2/M期
目的:探索AsS对K562细胞的诱导凋亡作用及其机制.方法:细胞凋亡的检测用流式细胞分析、基因组DNA电泳、细胞形态学观察等方法;Western-blot方法用于蛋白表达的检测;基因表达的变化用半定量RT-PCR方法.结果:AsS浓度在3μmol/L作用48~72h即可诱导K562细胞凋亡.3μmol/LAsS作用72h时,细胞凋亡率达34.4±3.3﹪;5μmol/LAsS作用48h、72h时,