论文部分内容阅读
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是一种共栖菌,它依附于猪的上呼吸道,也是一种机会菌,当机体免疫力下降时侵袭猪机体,感染后主要引起猪的多发性浆膜炎和关节炎。HPS对养猪业是一种潜在的威胁,一旦爆发会产生巨额的经济损失,是近年来危害养猪业最严重的细菌病之一,因此HPS也受到密切的关注。对于预防HPS病的爆发,主要通过灭活疫苗进行免疫,且灭活疫苗可产生良好的免疫保护能力。本实验基于已分离到的HPS菌株,通过不同的实验室方法对已分离的菌株进行鉴定和血清分型。利用已鉴定的HPS菌株进行摇瓶和反应器扩大培养菌体抗原的工艺化并对抗原培养条件进行优化。使用优化后的培养条件培养菌体抗原,试制灭活疫苗,并对试制疫苗进行安全性检验和效力检验以评价疫苗。本试验通过菌落及菌体形态学观察、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖性检验、生化鉴定、PCR鉴定等方法对已分离到的菌株RPBS0904-11、RPBS0905-3和RPBS0912-1株进行鉴定,确定该三株菌均为HPS,并利用PCR鉴定和琼脂扩散试验(KRG)对已鉴定的菌株进行血清分型,最终确定菌株RPBS0904-11为HPS 4型、菌株RPBS0905-3为HPS 5型、菌株RPBS0912-1为HPS 12型。利用传统摇瓶培养对已鉴定的HPS培养条件进行探索,确定了优势培养条件下所使用的动物血清种类、辅酶(NAD)添加量以及培养基p H环境等;利用反应器培养已鉴定的HPS并对培养条件进行优化,确定优势培养条件下所需要的补料种类、补料速度及补料方式等。在此基础上,利用反应器优化工艺培养菌体抗原,试制HPS三价(4、5、12)灭活疫苗,使用多倍免疫剂量免疫仔猪进行疫苗安全性检验以评价疫苗的安全性;使用免疫剂量免疫豚鼠进行疫苗效力性检验以评价该疫苗的免疫效果,根据免疫后豚鼠抗体效价远高于有效抗体水平,认为试制疫苗具有良好的免疫效果。对比分析反应器工艺和摇瓶工艺疫苗,二种工艺生产的疫苗在内毒素含量、疫苗菌体蛋白含量以及疫苗的免疫效果方面近乎无差异,反应器工艺疫苗完全可以替代传统摇瓶工艺疫苗,为大规模菌体发酵培养生产提供了重要的理论和实验依据。