瓜实蝇是一种广泛分布于热带、亚热带地区的世界性害虫,主要危害蔬菜、水果等100 多种植物,其中葫芦科和茄科植物是其主要寄主.目前,瓜实蝇危害的生物学和生态学特征已得到初步阐明,然而关于瓜实蝇对逆境适应力方面的研究还不是很深入.近年来,研究显示表观遗传学与表型变异和有机体对环境变化适应之间有紧密的联系,其主要表现为DNA 甲基化模式和染色体结构上的变化.当前,用于分析DNA 甲基化的方法较多,甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术是基于PCR 的一种新技术.本文对DNA 提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增等各环节进行分析研究,以建立适用于瓜实蝇基因组DNA 甲基化研究的技术体系,为瓜实蝇基因组DNA 甲基化多态性位点研究奠定基础.本文以实验室内长期饲养的瓜实蝇为研究材料,在其羽化后2-3 天取材,采用Omega Bio-tek 公司的E.Z.N.A.TM InsectDNA kit 提取高质量DNA,对酶切、连接、预扩增及选择性扩增进行分析,建立适用于瓜实蝇基因组DNA 甲基化多态性研究的优化体系：1)20 μL 酶切体系加10U 的限制性内切酶,基因组DNA 600 ng,37℃反应过夜；2)20 μL 连接体系加T4 连接酶1 U,HpaⅡ-MspⅠ-adapter接头50 pmol,EcoR I-adapter接头5 pmol,16 ℃反应12 h；3)25 μL 预扩增体系含连接产物(稀释30 倍)2.5 μL,2×EcoTaqPCR SuperMix 12.5μ l,EcoRA－HpaⅡ-MspⅠG 引物对各1μl(浓度为10μM)；4)25 μL 选择性扩增体系含预扩增产物(10 倍稀释)5 μ L,2×EcoTaq PCR SuperMix12.5μl,选择性扩增引物对EcoRC—HpaⅡ-MspⅠ-C 各3μl(浓度为10μM).该体系稳定性高、重复性好,适用于瓜实蝇基因组DNA 甲基化多态性研究.