【摘 要】
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目的 探讨超声(US)联合LHRHa脂质微泡靶向沉默Survivin基因对卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的影响.方法 利用生物素-亲和素桥接方式,通过链霉亲和素的桥接作用将生物素化的微泡与生物素化的靶向配体LHRHa结合,构建出带有特定配体的靶向超声微泡造影剂(TMBs),采用机械震荡法合成非靶向脂质微泡造影剂(NMBs).将对数生长期的卵巢癌A2780/DDP细胞随机分为7组：(a)对照组(b
【机 构】
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400010重庆市,重庆医科大学附属第二医院妇产科 重庆医科大学超声分子影像研究所
【出 处】
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第一届全国暨第二届国际超声分子影像学术会议
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目的 探讨超声(US)联合LHRHa脂质微泡靶向沉默Survivin基因对卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的影响.方法 利用生物素-亲和素桥接方式,通过链霉亲和素的桥接作用将生物素化的微泡与生物素化的靶向配体LHRHa结合,构建出带有特定配体的靶向超声微泡造影剂(TMBs),采用机械震荡法合成非靶向脂质微泡造影剂(NMBs).将对数生长期的卵巢癌A2780/DDP细胞随机分为7组：(a)对照组(b) Survivin-pshRNA组(c)Survivin-pshRNA+ NMBs组(d) Survivin-pshRNA+ TMBs组(e) Survivin-pshRNA+ US组(f) Survivin-pshRNA+NMBs +US组(g) Survivin-pshRNA +TMBs+US组,分别给予相应处理,荧光定量PCR、Western blotting分别检测处理后48 h各组Survivin在mRNA及蛋白水平表达情况；MTT法检测处理后24、48及72 h细胞生长存活率；流式细胞术检测凋亡率,电镜检测细胞超微结构的改变,Western blotting检测各组凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3表达水平.结果 与对照组相比,各处理组Survivin mRNA及Survivin蛋白均有不同程度下降,其中以(g)组下降最明显(P＜0.05)；透射电镜见(g)组出现明显的凋亡形态学改变.与对照组相比,各处理因素均可抑制A2780/DDP细胞增殖,且呈时间依赖性,其中(g)组细胞的增殖抑制明显大于同一时间点的其余各处理组(P＜0.05)；流式细胞仪检测细胞凋亡率发现,各处理因素均可诱导细胞凋亡,其中(g)组凋亡率高达(28.99±2.70)％,明显高于其他组(P＜0.05)；凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9表达量分别为0.70±0.26、2.60±0.21,明显高于其他处理组(P＜0.05).结论 超声联合LHRHa靶向微泡介导Survivin-pshRNA转染卵巢癌A2780/DDP细胞,能有效沉默survivin基因在A2780/DDP细胞中表达,并促进A2780/DDP细胞凋亡,其亡机制与凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9表达上调有关.
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