人肌红蛋白单克隆抗体的制备

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为了制备用于临床心脑血管疾病监测的高特异性、高敏感性的抗肌红蛋白单克隆抗体,本研究先利用血清提纯的人肌红蛋白抗原筛选出高亲和力的单克隆抗体,再利用本实验室原核表达的Myo纯化抗原筛选最具特异性的抗体,并且通过夹心ELISA的方法得到可进行夹心配对单克隆抗体。其结果:1)用血清提纯的人肌红蛋白抗原免疫小鼠,经过细胞融合及筛选得到22株分泌特异性抗体的细胞株。再经亚克隆筛选,最终获得5株抗体分泌量高亲和力强的细胞株;2)单利用本实验室原核表达的Myo纯化抗原经Western Blot检测结果显示,所筛选的5株抗体中,除一株抗体(编号为#16-3.3)与Myo表达纯抗原反应较弱以外,其他4株抗体(编号为#14-4.3、#17-1.2、#18.2和#19-2.3)皆能与Myo表达纯抗原反应,以此筛选获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体;经夹心ELISA检测,#17-1.2可分别与其它3株抗体进行夹心对配。上述结果表明,成功筛选获得高敏感性及特异性的Myo单克隆抗体,为建立检测人类心脏疾病,尤其是急性心肌梗塞的临床检测试剂盒的制备奠定了基础。此外,上述单克隆抗体可进行夹心配对实验,适用于未来抗体芯片的研发制备中,为一种新的联合快速诊断心脏疾病方法的建立提供了科学依据。
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