游离二氧化硅诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的Western blot鉴定

来源 :中国毒理学会第五次中青年科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abc0454
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  目的:探讨游离二氧化硅诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)发生上皮间质转分化的细胞表面标志物蛋白表达情况.方法:提取SPF级SD大鼠原代巨噬细胞,并常规培养巨噬细胞和RLE-6TN.CCK-8细胞活性实验确定SiO2的染尘浓度,以游离二氧化硅为受试物观察RLE-6TN发生上皮间质转分化的情况.实验分为4组:直接对照组、直接染尘组、间接对照组和间接染尘组,在游离二氧化硅染尘0h、24h、48h、72h后,分别收集各组的RLE-6TN并提取蛋白,应用Western blot测定RLE-6TN的E-黏钙蛋白和α-平滑肌动蛋白的蛋白表达水平.结果:CCK-8细胞活性实验确定游离二氧化硅的染尘浓度为100 μ g/ml;随着SiO2染尘时间的延长,直接染尘和间接染尘的方式均能使E-黏钙蛋白的表达下降、α-平滑肌动蛋白的表达上升,差异具有统计学意义(P<0.05);直接染尘组与直接对照组、间接染尘组与间接对照组相比,E-黏钙蛋白的表达差异在48h和72h时均具有统计学意义(P<0.05),α-平滑肌动蛋白的表达差异在24h、48h和72h时均具有统计学意义(P<0.05);间接染尘组与直接染尘组相比,24h、48h和72h时的E-黏钙蛋白的表达差异均具有统计学意义(P<0.05),48h和72h时的α-平滑肌动蛋白差异具有统计学意义(P<0.05).结论:游离二氧化硅能够诱导RLE-6TN发生上皮间质转分化;间接染尘组更易于发生上皮间质转分化;上皮间质转分化过程具有一定的时间依赖性.
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