微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆及表达

来源 :中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aminn
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
提取微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)鼠基因型卵囊总RNA,RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD 18-T载体中,进行测序和同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显不,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列比较,同源性为98.66%,氨基酸序列同源性为98.65%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达后的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化所得的重组蛋白纯度达95.2%。 重组蛋白可被微小隐孢子虫感染兔血清特异性识别,用重组蛋白三免后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明该重组蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。对发展免疫诊断和免疫预防技术有重要价值。
其他文献
[目的]构建四种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体。制备六联融合毒素的血清抗体。[方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性。[结果
采用液相色谱串联质谱法测定鸡组织(肌肉、肝)中喹啉类兽药残留标示物喹啉-2-羧酸和3-甲基-喹嗯啉-2-羧酸的残留含量。组织匀浆样品经碱水解、液液萃取,采用LC-MS/MS电喷雾电离(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM),以氘代喹嗯啉-2-羧酸为内标进行定量。检出限均小于1μg/kg。
以人工合成的无色孔雀石绿-卵清白蛋白(LMG-OVA)为包被抗原,无色孔雀石绿为竞争半抗原,两者与一定量的LMG-McAb反应,结果表明抗LMG-McAb稀释倍数为1:120000,包被抗原质量浓度为0.80ug/ml,最适检测范围1-256 ng/ml,LMG最低检测限为1.24μg/L ng/ml,标准曲线的批内和批间变异系数分别为4.307%、4.876%,回归方程为y=-37.773x+9
为了评估镰形扇头蜱IgG结合蛋白(immunoglobulin bindingprotein,IGBP)作为抗蜱疫苗分子的潜力,将IGBP基因亚克隆到pGEX-4T-1载体,转化到感受态细胞BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔进行攻蜱试验。结果显示,在IGBP的诱导下。重组质粒pGEX-41-1-IGBP在大肠杆菌中获得高效表达,产生GST-IGBP融合蛋白。用融合蛋白免疫家兔后。
目的:观察以Iscom佐剂的EgM家族重组蛋白(EgM9)免疫犬后血清抗体变化情况。方法:用Iscom佐剂的EgM9对犬进行免疫。通过间接ELISA的方法检测血清特异性抗体(IgG、IgG1、IgG2、IgA、IgM和IgE)的变化规律。结果:经统计分析,特异性抗体及其亚类IgG、IgG1、IgG2免疫组与对照组差异极显著(P0.05).结论:Iscom佐剂能够辅助EgM9刺激起机体免疫反应。
观察爱谱锐克-食肉动物专用驱虫片(每片含吡喹酮100毫克)对犬细粒棘球绦虫驱虫效果。将人工感染细粒棘球绦虫实验犬分设5组,I组:试验药品2.5 mg/kg;II组:试验药品5 mg/kg,;Ⅲ组:试验药品7.5mg/kg;IV组:对照药品5mg/kg;V组:空白对照。投药后72hr剖解试验犬,检查各组荷虫情况。I、II、III、IV组粗计驱虫率均为100%。5 mg/kg推荐剂量可成为犬细粒棘球绦
目的:以比格犬为实验动物经口感染原头蚴,观察细粒棘球绦虫成虫的感染情况。同时按不同剂量原头蚴感染犬,了解该犬较为适宜的原头蚴感染计量。方法:分别以5万、15万、25万枚原头蚴感染6只比格犬,感染后40天开始检查粪便有无虫卵排出。结果:人工感染原头蚴后48天虫体开始排卵;6只比格犬(Beagle)细粒棘球绦虫人工感染率为100%,其中5万枚感染的平均荷虫3457条。成熟2074条,未成熟1383条;
目的:细粒棘球绦虫原头蚴可以在体外向成虫和囊蚴两个方向发育,为研究细胞及虫体的分化提供一个较好的体外实验模型;本文通过原头蚴在两种细胞培养液中(RPMI-1640和MEM)培养以观察其存活、生长及发育情况,从而为研究寄生虫发育提供最基本的数据资料。方法:细粒棘球绦虫幼虫-原头蚴培养在细胞培养基(RPMI-1640和MEM)中分4组,即I组纯RPMI-1640培养液;Ⅱ组:含10%的小牛血清的164
根据GenBank公布的隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计一对引物,并以标准基因组DNA为模板,初步建立检测奶牛隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-Time PCR方法,对奶牛微小隐孢子虫(c.parvum)和安氏隐孢子虫(C.andersoni)阳性样品和40份奶牛粪便进行检测。结果显示,此次建立的Real-Time PCR对C.parvum和C.andersoni均能扩增出曲线,且
为克隆和表达编码微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)卵囊壁蛋白CP41基因.以本室繁殖保存的微小隐孢子虫鼠基因型卵囊提取总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T并进行序列测定,与GenBank下载的序列进行同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆到pGEX-5x-3原核表达载体,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细