低强度超声激励靶向纳米微泡介导基因转染肝癌荷瘤鼠的实验研究

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目的本研究旨在制备一种新型携NET-1 siRNA肝癌靶向纳米微泡复合物,评价其体内治疗效果,并采用新型超声弹性技术——声触诊组织成像量化技术(Virtual touch tissue imaging and quantification,VTIQ)评估其对瘤体组织软硬度的影响。方法①采用薄膜水化联合机械震荡法制备纳米微泡,通过"生物素(亲和素"系统耦连NET-lsiRNA以及GPC3,形成载NET-1siRNA靶向纳米微泡复合物,测量其粒径,表征及基因包封率。②将人源性肝癌细胞株(HepG(2)与生理盐水混合液种于BALB/c背部皮下,建立24只荷瘤鼠模型。③将其随机分为A、B、C三组,分别经尾静脉注射生理盐水,普通纳米微泡,载NET-1siRNA靶向纳米微泡复合物,对三组裸鼠瘤体均进行低强度超声辐照,辐照条件:频率1 MHz,脉冲重复频率1 kHz,占空比50%,强度1w/cm2。每隔4天治疗一次,共治疗四次。④治疗前、中、后用VTIQ测量三组瘤体组织的平均和最大剪切波速度值(SWSmean,SWSmax)。每隔2天记录瘤体最大径和裸鼠存活数。观察60天后,处死,取出瘤体组织,进行免疫组化染色检测NET-1蛋白表达水平。此外,取荷瘤鼠肝肾组织标本,进行HE染色,镜下观察治疗是否存在肝肾毒性。结果治疗后,与A、B两组相比,C组裸鼠瘤体最大径生长曲线存在统计学差异(P<0.05),生长趋势变缓,瘤体最大径减小,平均生存期延长,NET-1蛋白表达水平显著降低。VTIQ测量值结果显示,治疗前三组裸鼠剪切波速度值未见统计学差异,基因治疗后,C组瘤体SWSmean,SWSmax均低于A、B组,且具有统计学差异,瘤体组织质地相对较软。镜下观察三组裸鼠肝肾HE染色标本均未见明显结构损伤。结论低强度超声联合载NET-1siRNA靶向纳米微泡能够有效抑制体内肝癌细胞增殖,延长荷瘤鼠生存期,且无肝肾毒性,为临床肝癌基因治疗提供了一个新的途径。同时VTIQ可安全无创地监测肿瘤组织硬度变化,进行活体动物的疗效评价,为肝癌治疗及预后评价提供新思路。
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