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采用两相分散聚合法制备了单分散的共价键负载两种染料的聚苯乙烯荧光微球。与传统的分散聚合法相比,两相法减少了对粒子成核过程的干扰,有效地控制了微球粒径及其分布。通过改变两种染料的比例,我们得到了在单一激发光源下具有两个荧光发射带且荧光强度的比例同的一系列荧光微球。在微球结构的保护作用下,微球的荧光具有较好抗溶剂影响的能力,其荧光稳定性比单纯染料大大提高。这类微球在多元生物分析中有潜在的应用。