【摘 要】
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目的:壳聚糖(CS)以其安全性和转运、保护基因的能力,被认为是有发展潜力的非病毒类载体.就目前研究,CS作为基因载体存在着转染率低的问题,本文以增强型绿色荧光蛋白质粒基因(
【机 构】
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中国药科大学药物制剂研究所,南京,210009
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目的:壳聚糖(CS)以其安全性和转运、保护基因的能力,被认为是有发展潜力的非病毒类载体.就目前研究,CS作为基因载体存在着转染率低的问题,本文以增强型绿色荧光蛋白质粒基因(pEGFP)作为报告基因进行细胞转染试验,探讨影响CS载体转染率的相关因素,寻找提高转染的思路和试验依据. 方法:复凝聚法制备pEGFP/CS纳米粒,选用HEK293细胞,考察了CS分子量、处方变量N/P比值、纳米粒粒径、介质pH以及血清等因素对CS介导的体外转染效率的影响. 结果:pEGFP/CS纳米粒在HEK293细胞中获得成功转染,在同一试验条件下,裸pEGFP没有转染.CS载体介导的转染率与其分子量有关,5KDa的低分子量水溶性CS获得较高转染率, 分别是173和425KDa CS的1.9倍和1.8倍.转染率与纳米粒的N/P比值相关,N/P比值增加,转染率提高,当N/P＝5,转染率基本达坪.230～270nm、560～600nm和1240～1290nm三个粒径段样品的转染率无显著性差异.转染介质pH值影响转染效率,介质pH值≤6.8的转染效率高于pH7.4的转染率.脂质体介导的转染受血清抑制,而CS介导的转染不受血清影响. 结论:pEGFP/CS纳米粒在生物体内可保持较高的稳定性,pEGFP/CS纳米粒的高稳定性是CS介导转染的重要限速步骤,增加pEGFP/CS纳米粒在胞内解离,可能是提高转染的一个策略.CS分子量、N/P比值和介质pH是影响转染的重要因素.低分子量水溶性CS有利于提高转染.最适宜转染的N/P比值为5,介质pH值为6.8.在本试验230 ～1290nm 粒径范围,粒径对转染效率无影响.
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