猪流感病毒的分离及初步鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:netchina123
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猪是禽流感病毒"禽-猪-人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。1999~2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002),并从2001~2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒.近年来猪流感的流行有上升的趋势,特别是2006年夏季以来席卷江西、江苏,现在已经转移到山东辽宁等地的无名高热在发病前大多都出现发烧流鼻涕等典型流感症状,2005年11月-2006年12月期间,我们对来自青岛、烟台、南昌、江苏响水、葫芦岛等地区的426份样品进行了猪流感及其亚型的分型检测。检测结果显示,H1N1和H3N2在这些地区还广泛存在,主要以H3N2为主,在葫芦岛病料中发现有一株H5N1,在青岛、烟台也发现有H9N2.
其他文献
2006年四川成都、西昌等地爆发流行具有鸭病毒性肝炎(DVH)典型临床症状和病变的传染病,从间接免疫荧光检测呈阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30-40nm,对氯仿、pH3.0、50℃ 60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24-60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被1型鸭肝炎病毒(DHV)高免血清中和.分离
临床对绿脓杆菌病的诊断常采用传统的病原分离鉴定和血清学方法,但病原分离和生化鉴定不仅费时费力,而且敏感性和特异性都较差.血清学诊断方法不能在病的早期得出结果,也可能因实验室的不同而产生检验差异。为了解决这些难题,现采用绿脓杆菌的单项PCR实验方法,可分别检测每株病原.使用其中具有特异性的1对引物,建立了绿脓杆菌algX基因的PCR检测方法,能够在二个反应管中PCR各扩增出1425bp1条特异性片段
通过致病力试验、免疫原性检测对肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株IBVXJ-2进行了生物学特性的研究。致病力检测结果证实IBVXJ-2株可以致SPF鸡胚卷缩、僵化,EID50达10-8.3/0.1m;鸡胚肾细胞在接毒后96h出现皱缩、脱落等明显的细胞病变;对20日龄非免疫鸡攻毒后第2天,试验鸡出现甩鼻、伸颈张口呼吸症状。将IBVXJ-2株抗原经乳化后接种1月龄非免疫鸡,在免疫后22天和44天用ELIS
应用PCR(或RT-PCR)分别扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒-2型、日本乙型脑炎病毒和猪瘟病毒的一段保守序列,克隆到pMD 18-T Simple Vector构建重组质拉,用于制备各病毒的捕获DNA.将各捕获DNA按一定的阵列点。硝酸纤维素膜上后加以固定,制成诊断基因芯片.在多重PCR扩增过程中掺入生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进
通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们构建了一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株.首先构建重组转移质粒pEHA1.将pEHA1转化供体大肠杆菌β2155,并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养5小时,然后涂到含霉素抗性的培养基上培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株.通过PCR、遗传稳定
将APP apxⅣ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apxⅣ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,结果获得了3株能稳定分泌抗apxⅣ蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为4H3,1D11和4C1.亚型
提取猪小肠total RNA,根据已发表PMAP37的基因序列进行RT-PCR扩增,并将RT-PCR产物克隆至pMD19-Tsimple载体测序。结果表明所得序列516bp,开放阅读框504bp,编码167个氨基酸,分子量18.9kd,与目的序列同源性高达99.6%。本研究为进一步研制用于家禽细菌性疾病治疗的高效、广谱、无药残的新型抗菌药物提供基础条件。
猪链球菌2型(Streptocooccus suis tupe 2,SS2)可引起猪脑膜炎、心内膜炎、关节炎、肺炎和败血症等,也可感染人并致死,是一种重要的人畜共患病病原.猪链球菌2型的毒力因子及其致病机制十分复杂,而各毒力因子的作用机理及毒力因子之间的相互作用关系还不清楚.迄今为止已知的毒力因子主要有英膜多糖、溶菌酶释放蛋白、胞外因子、溶血素和粘附素等,本文拟对猪链球菌2型的毒力因子作一综述。
将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rHA,再感染细胞,超声收获HA蛋白。通过血凝和血凝抑制、免疫印迹法、ELISA分析表明该蛋白得到表达
根据Genbank发表的核酸序列,运用DNAMAN软件,分析流感病毒的HA和NA基因序列间的差异性,分别设计合成流感病毒H1、H3、H9、N1和N2的特异分型引物,并根据A型流感病毒的型特异性基因(M基因),设计了A型流感病毒的通用引物.应用RT-PCR分别扩增各亚型的特异片断,并克隆到pMD18-TSimple Vector构建重组质粒,用于各亚型探针的制备.将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素