目的:分析嗜酸性粒细胞型哮喘患者基因启动子及外显子单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism,SNP）,探讨差异SNP的功能及其与临床特征及生物标志物的相关性;检测嗜酸性粒细胞型哮喘患者长链非编码RNA（long noncoding RNA）,探索新型lncRNA的调控机制及其与临床特征及生物标志物的相关性。为嗜酸性粒细胞型哮喘患者的发病机制、个体化诊断及靶向治疗提供理论依据。方法:第一部分嗜酸性粒细胞型哮喘患者基因启动子及外显子分析及其与临床特征及生物标志物相关性分析1.入选57例嗜酸性粒细胞型哮喘患者,收集患者临床资料及生物标志物（发病年龄、吸烟史、家族及个人过敏史、总IgE、外周血嗜酸性粒细胞（Eos）%及诱导痰Eos%、肺功能、呼出气一氧化氮（FeNO）、ACT、ACQ评分、焦虑抑郁情绪测定、IL-5、IL-6、IL-8、IL-13、TNF-α）,利用高通量测序技术检测上述嗜酸性粒细胞型哮喘患者109个哮喘相关基因启动子及外显子SNP。通过病例-对照研究找出嗜酸性粒细胞型哮喘患者差异SNP。2.利用Sanger测序技术验证Th2型炎症通路活化关键转录因子GATA3基因启动子rs1269486A>G 突变。3.利用荧光素酶报告基因研究GATA3基因启动子rs1269486A>G突变功能。4.检测GATA3基因启动子rs1269486 A>G突变与临床特征及生物标志物的相关性。第二部分嗜酸性粒细胞型哮喘患者lncRNA研究及其与临床特征及生物标志物相关性分析1.入选12例嗜酸性粒细胞型哮喘患者,6例中性粒细胞型哮喘患者及6例健康对照者,收集上述受试者临床特征及生物标志物,利用高通量测序等技术筛选嗜酸性粒细胞型哮喘患者特异表达lncRNA并分析其生物功能。2.利用PCR技术对嗜酸性粒细胞型哮喘患者lncRNA的进行验证并分析其与临床特征及生物标志物的相关性。3.利用JURKAT细胞及人CD4+T淋巴细胞进行嗜酸性粒细胞型哮喘患者lncRNA参与Th2型炎症通路分析。第三部分嗜酸性粒细胞型哮喘患者新型lncRNA（LNC₀00127）在哮喘-Th2型炎症通路中的调控作用1.利用荧光标记原位杂交技术（FISH）进行新型lncRNA（LNC₀00127）定位分析。2.利用干扰RNA敲减JURKAT细胞中的新型lncRNA（LNC₀00127）,构建慢病毒稳转细胞系并鉴定。3.利用PCR芯片及Western-Blot探索新型lncRNA（LNC₀00127）在Th2型炎症通路的调控作用。结果:第一部分:嗜酸性粒细胞型哮喘患者基因启动子及外显子分析及其与临床特征及生物标志物相关性分析1.57例嗜酸性粒细胞型哮喘患者检测了 109个哮喘基因启动子及外显子,共检测出47个差异SNP（P<0.05）,其中位于启动子16个,位于外显子31个。外显子新发现2个新型SNP,分别位于IRF2,NFKB1基因。2.在57例嗜酸性粒细胞型哮喘患者中发现12例携带GATA3 rs1269486 A>G突变（P<0.05）。3.嗜酸性粒细胞型哮喘患者GATA3 rs1269486 A>G突变位点等位基因为G时较位点为A时基因荧光素酶活性显著增强（P<0.05）,说明GATA3 rs1269486多态性位点由A突变为G后可能提高了 GATA3基因转录活性。4.与嗜酸性粒细胞型哮喘患者GATA3 rs1269486 A>G等位基因为A的患者比较,携带等位基因G的患者家族哮喘遗传比例更高、重症患者比例更高、气流持续受限比例及血IL-5水平更高、焦虑状态更重（P<0.05）,而FEV₁/FVC%及PEF%更低（P<0.05）。GATA3基因启动子SNP rs1269486 A>G突变的患者外周血IL-5与FEV₁/FVC%及PEF%呈负相关。第二部分:嗜酸性粒细胞型哮喘患者lncRNA研究及其与临床特征及生物标志物相关性分析1.与中性粒细胞型哮喘组及正常对照组比较,嗜酸性粒细胞型哮喘患者组差异表达的lncRNA 190个,其中表达上调的81个,表达下调的109个;在差异表达的190 个lncRNA 中发现 3 个lncRNA（LNC₀00127,RP11-408H1.3,OIP5-ASl）与嗜酸性粒细胞型哮喘-Th2型炎症通路相关基因共表达,其中发现了新型lncRNA:LNC₀00127。2.通过PCR验证,新型LNC₀00127在嗜酸性粒细胞型哮喘患者组中明显升高（P<0.05）,与中性粒细胞型哮喘患者和正常对照组相比,新型LNC₀00127表达升高的嗜酸性粒细胞型哮喘患者总IgE、FeNO、外周血及诱导痰中Eos%、家族哮喘遗传比例及血IL-5水平更高（P<0.05）;而FEV%和FEV₁/FVC%更低（P<0.05）。新型LNC₀00127表达升高的患者外周血IL-5与FEV₁%及FEV₁/FVC%呈负相关。3.新型LNC₀00127在PMA/CD28刺激的JURKAT细胞及人CD4+T细胞中表达升高（P<0.05）。第三部分嗜酸性粒细胞型哮喘患者新型lncRNA（LNC₀00127）在哮喘-Th2型炎症通路中的调控作用1.新型LNC₀00127定位于JURKAT细胞的细胞核内。2.干扰RNA慢病毒载体构建成功,pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNAY6472敲减JURKAT中的新型LNC₀00127效率最高（P<0.05）。3.敲减新型LNC₀00127可导致JURKAT细胞向Th2型细胞分化过程中关键转录因子GATA3、STAT5A及T淋巴细胞表面受体CD40L、CCR8、CRLF2表达下降（P<0.05）。结论:1.利用高通量测序技术检测57例嗜酸性粒细胞型哮喘患者的109个哮喘相关基因的启动子及外显子SNP。发现12例嗜酸性粒细胞型哮喘患者携带GATA3 rs1269486A>G突变（突变率21%）,该突变可使GATA3基因转录活性升高,目前尚未见文献报道。携带GATA3 rs1269486 A>G突变的嗜酸性粒细胞型哮喘患者有明显的家族哮喘遗传倾向、且病情更重、肺功能更差、焦虑状态更重以及血IL-5水平更高,而且携带GATA3 rs1269486 A>G突变的患者外周血IL-5与FEV₁/FVC%及PEF%呈负相关,因此提示GATA3 rs1269486 A>G突变可能与嗜酸性粒细胞型哮喘发病机制及临床特征相关,并有可能成为该表型哮喘的生物标志物。2.首次发现的新型LNC₀00127在嗜酸性粒细胞型哮喘患者中表达显著升高且新型LNC₀00127高表达的患者总IgE、FeNO、外周血及诱导痰中Eos%、家族哮喘遗传比例及血IL-5水平更高,而FEV₁%和FEV₁/FVC%更低,新型LNC₀00127表达升高的患者外周血IL-5与FEV₁%及FEV₁/FVC%呈负相关,提示新型LNC₀00127有可能成为嗜酸性粒细胞型哮喘患者的生物标志物并与临床特征及肺功能密切相关。3.嗜酸性粒细胞型哮喘患者携带的新型LNC₀00127参与了转录因子GATA3,STAT5A 及 CCR8、CD40L、CRLF2 等 T 淋巴细胞表面受体（T cell receptor,TCR）的调控,其可能通过TCR-STAT-GATA3通路影响Th0型细胞向Th2型细胞分化,从而可能参与嗜酸性粒细胞型哮喘的发病机制。未来新型LNC₀00127有可能成为GATA3基因介导的嗜酸性粒细胞型哮喘的治疗靶点。