Has-miR-206对CYP3A4的调控机制研究

来源 :第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxlgqm
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  本研究利用Microcosm Target和Targetscan在线数据库软件,对人源性CYP3A4基因的3UTR序列进行分析,寻找到可能与人源性CYP3A4基因的3UTR序列相结合的miRNA分子hsa-miR-206.并进一步探讨hsa-miR-206对细胞中人源性CYP3A4的影响机制.构建pCMX-Luc-CYP3A4 3UTR报告基因,利用报告基因实验考察hsa-miR-206能否与人源性CYP3A4 3UTR序列相结合:同时在细胞水平考察过表达hsa-miR-206对CYP3A4基因和蛋白表达水平的影响,使用Real time PCR检测mRNA的表达水平,Western Blot检测蛋白的表达水平.Microcosm Target和Targetscan的预测结果提示hsa-miR-206具有较大的几率能够与CYP3A4基因作用并引起相应的调控行为.细胞实验结果表明,在转染了pCMX-Luc-CYP3A4 3UTR报告基因质粒的LS174T细胞内,共转染pCMX-miR-206能够显著抑制荧光素酶基因的表达,其抑制百分比约为35%: qPCR表明在LS 174T细胞内过表达hsa-miR-206,能够显著地降低CYP3A4基因mRNA表达水平,其抑制百分比约为40%.Western Blot表明在LS174T细胞内过表达hsa-miR-206,能够显著地降低CYP3A4基因蛋白表达水平,其抑制百分比约为20%.本研究首次证实了hsa-miR-206能够作用于人源性CYP3A4,并下调CYP3A4的mRNA和蛋白表达水平,提示hsa-miR-206可能参与CYP3A4的转录后调控,抑制CYP3A4的表达.
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