【摘 要】
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环形泰勒虫(Theileria annulata)属于顶复门(Apicomplexa)、梨形虫纲(Piroplasmea)、泰勒科(Theileriidae)、泰勒属(Theileria),在宿主体内存在裂殖体和裂殖子两个阶段,前者寄生于单核/巨噬细胞、树突状细胞和B淋巴细胞中,后者寄生于红细胞内.环形泰勒虫裂殖体可使牛宿主淋巴细胞发生转化,在体外培养过程中可获得类似肿瘤样细胞那样的无限增殖能力.
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州 730046;宁夏大学农学院 银川 750021
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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环形泰勒虫(Theileria annulata)属于顶复门(Apicomplexa)、梨形虫纲(Piroplasmea)、泰勒科(Theileriidae)、泰勒属(Theileria),在宿主体内存在裂殖体和裂殖子两个阶段,前者寄生于单核/巨噬细胞、树突状细胞和B淋巴细胞中,后者寄生于红细胞内.环形泰勒虫裂殖体可使牛宿主淋巴细胞发生转化,在体外培养过程中可获得类似肿瘤样细胞那样的无限增殖能力.利用相对实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对转化宿主细胞信号通路进行分析是研究这种转化机制的一种有效手段.而可靠的qPCR结果依赖于稳定内参基因的选择,但截至今日,还未见关于环形泰勒虫转化宿主细胞内参基因筛选的报道.因此,本研究以环形泰勒虫裂殖体转化单个核细胞(PBMCs)和非感染牛外周血单个核细胞为实验材料,提取总RNA,反转录合成eDNA,再分别将此模板进行10倍(10-1-10-6)系列稀释,然后以此12份样品为模板分别对18S rRNA(Ribosomal RNA),GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase),ACTB(β-actin),PRKG 1(protein kinase cGMP-dependent,type Ⅰ)和TBP(TATA box binding protein)等五个牛内参基因进行real-time PCR分析,从而获得相应的Ct值和溶解曲线；然后对五个内参基因的表达丰度、引物特异性、标准曲线、扩增效率以及利用geNorm、NormFinder程序进行了综合性评价.分析结果发现,五个内参基因引物扩增效率介于81.2％～120.1％,特异性均较好；18S rRNA的表达丰度最高,TBP最低；18S rRNA和GAPDH均具有良好的线性扩增；GeNorm和Normfinder分析结果均发现18S rRNA为最稳定内参基因,且18S rRNA和GAPDH是最好的组合.综合以上分析结果,在进行环形泰勒虫转化宿主细胞信号通路的real-time PCR分析时,我们推荐18S作为最稳定内参基,18S和GAPDH可以作为最好内参组合.
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