【摘 要】
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AcMNPV p33 为杆状病毒的核心基因之一,以前的研究发现P33 是一种结合FAD 的巯基氧化酶,p33 基因的缺失极大地抑制了杆状病毒BV 的产生,并影响了多粒包埋ODV 的形成.关于AcMNPV P33(AcP33)的晶体结构和功能都已有所报道,但其如何从分子水平上影响病毒的感染和增殖以及具体的催化机制,目前并不清楚.本研究解析了分辨率为2.46 埃的AcP33 晶体结构,进而依据晶体结构
【机 构】
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中国科学院武汉病毒研究所,湖北武汉430071
【出 处】
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第六届全国农业微生物研究及产业化研讨会、第十五届全国杀虫微生物学术研讨会、第十一届全国虫生真菌学术研讨会
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AcMNPV p33 为杆状病毒的核心基因之一,以前的研究发现P33 是一种结合FAD 的巯基氧化酶,p33 基因的缺失极大地抑制了杆状病毒BV 的产生,并影响了多粒包埋ODV 的形成.关于AcMNPV P33(AcP33)的晶体结构和功能都已有所报道,但其如何从分子水平上影响病毒的感染和增殖以及具体的催化机制,目前并不清楚.本研究解析了分辨率为2.46 埃的AcP33 晶体结构,进而依据晶体结构鉴别出分布在蛋白表面的三个较保守的区域或位点,分别为二聚体界面、FAD 结合区和R127-E183 形成的盐桥.针对该三个保守区域的关键氨基酸分别设计构建了一系列的突变体.在体外通过测试纯化的野生型和突变体蛋白巯基氧化酶活性,发现位于FAD 结合区和二聚体界面的保守氨基酸的突变显著地抑制了P33 的巯基氧化酶活性,而盐桥位点的突变并不影响巯基氧化酶活性.同时我们也解析了分辨率在2.7 埃以内的五种突变体蛋白的晶体结构,结果表明在巯基氧化酶活性位点上,野生型和盐桥突变体比FAD 结合区和界面突变体显示出更好的柔性,这可能是由于巯基氧化酶在活性位点的构象上需要更好的灵活性来完成其催化反应.另一方面,通过构建一系列含有突变型P33 的重组AcMNPV,在体内水平上研究突变型P33 对病毒增殖和包装的影响,结果表明突变体重组病毒均能产生感染性的BV,但突变型P33 对BV 的感染性、ODV 的包埋以及对虫体感染的影响仍需通过生长曲线,电镜切片观察和生物测定等实验来证实.
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