【摘 要】
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确定了快速测定红曲霉谷氨酸脱羧酶(GAD)酶活的测定方法一比色法。得到GAD酶活的适宜反应底物体系为:0.1mol/L的柠檬酸缓冲液,pH5.0,内含50mmol/L底物L-谷氨酸钠(L-MSG)、0.1
【出 处】
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2007年全国包装与食品工程学术年会
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确定了快速测定红曲霉谷氨酸脱羧酶(GAD)酶活的测定方法一比色法。得到GAD酶活的适宜反应底物体系为:0.1mol/L的柠檬酸缓冲液,pH5.0,内含50mmol/L底物L-谷氨酸钠(L-MSG)、0.1mmol/L5-磷酸吡哆醛(PLP):测定方法为:200μL底物溶液和100μL酶液于37℃水浴中反应一定时间(根据活力火小反应0.5～20h不等),在冰浴中加入200μL、0.2mol/L、pH9.0的硼酸盐缓冲液终止反应,再加入1.0 mL新鲜配制的6％苯酚和400μL次氯酸钠溶液并充分振荡,置于沸水浴中反应10 min,迅速在冰浴中冷却5min,于630nm下测定吸光值。通过细胞破碎、(NH4),SO,盐析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析,对红曲霉GAD进行了有效的分离和纯化,纯化后酶活提高了6.56倍。采用SDS-PAGE初步断定出红曲霉GAD的蛋白分子量在67KD左右。红曲霉GAD酶液最适反应温度为30℃。在pH 4.4～4.8范围内酶活较高,红曲霉培养到第6天时GAD活性达到最高。
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