【摘 要】
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目的 通过慢病毒介导siRNA 沉默泛素结合酶E2/UbcH10 基因,研究基因沉默后对多发性骨髓瘤细胞的作用影响.方法 通过RT-PCR 和蛋白质免疫印迹法检测多发性骨髓瘤细胞内Ubc
【机 构】
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第二军医大学长征医院血液内科、全军骨髓瘤与淋巴瘤疾病中心 上海,200003
【出 处】
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第四届全国血液肿瘤学术大会暨第七届全国淋巴肿瘤诊治进展研讨会
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目的 通过慢病毒介导siRNA 沉默泛素结合酶E2/UbcH10 基因,研究基因沉默后对多发性骨髓瘤细胞的作用影响.方法 通过RT-PCR 和蛋白质免疫印迹法检测多发性骨髓瘤细胞内UbcH10 mRNA 及蛋白表达的基础含量.构建针对UhcH10 基因的siRNA-UbcH10 慢病毒载体,并使用该载体感染骨髓瘤NCI-H919、U266、MM.1S 细胞株,以空白和阴性质粒作为对照组,检测感染24、48、72 h 后细胞内UbcH10 mRNA 及蛋白含量.并采用CCK-8 法检测相应时间点的细胞活力,及流式细胞术检测细胞周期变化情况.结果 检测6 种多发性骨髓瘤细胞株的UbcH10 基因表达情况,均显著高于正常对照(P＜0.05).成功构建siRNA-UbcH10 慢病毒载体,并感染UbcH10 表达量较高的3 株骨髓瘤细胞(NCI-H919、U266、MM.1S).以空白组和阴性载体为对照,在感染siRNA慢病毒载体后,3 组细胞中UbcH10 基因的mRNA 及蛋白含量较对照组均明显下降(P＞0.05),且以72 h 最明显.使用siRNA 慢病毒转染骨髓瘤细胞24、48、72 h 后,3 组细胞增殖活性均较对照组显著降低,凋亡比例均显著增加,同时G2/M 期细胞比例显著升高(P＜0.05).结论 通过沉默UbcH10基因可显著抑制骨髓瘤细胞的增殖活性,增加细胞凋亡比例,并使细胞阻滞于细胞周期G2 期,最终可达到抑制骨髓瘤细胞恶性增殖的目的.
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