【摘 要】
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为了解牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的生物学特性.本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫NcG-RA7基因,将PCR产物连接到pMD-18T Simple Vector载体,构建pMD 18-NcGRA7克隆质粒,经P
【机 构】
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延边大学农学院动物医学系,吉林延吉,133002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为了解牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的生物学特性.本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫NcG-RA7基因,将PCR产物连接到pMD-18T Simple Vector载体,构建pMD 18-NcGRA7克隆质粒,经PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,将NcGRA7基因连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-N-cGRA7,转化大肠杆菌BL21,筛选阳性克隆,将PCR鉴定和酶切鉴定正确的重组质粒进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表达产物.结果表明,扩增的NcGRA7基因片段大小为701bp,编码233个氨基酸,与GenBank中发表的NcGRA7(AF 176649)核苷酸序列同源性为98.7％;Western blot分析表达蛋白的分子量为52 ku,具有较好的免疫活性.本试验为犬新孢子虫NcGRA7基因疫苗的研究奠定了基础.
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