同型半胱氨酸代谢中氨基酸代谢物的细胞内LC-MS/MS定量新方法

来源 :中国化学会第29届学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zjg760623
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  目的 同型半胱氨酸代谢异常是许多慢性疾病和发育性疾病的危险因素,定量检测同型半胱氨酸及其上下游代谢物一直是国内外研究者关注的热点问题1-3.本研究建立了灵敏度高、稳定性和重复性好且分析速度快的高效液相色谱-串联质谱定量细胞内一碳代谢 9 种氨基酸代谢物的方法. 方法 选择二硫苏糖醇(DTT)作为还原剂维持同型半胱氨酸和半胱氨酸中巯基的还原状态,进一步选择对 9 种待测氨基酸有良好保留且选择性好的固相萃取材料,对相关氨基酸进行纯化富集.在此基础上应用氯甲酸异丙酯进行柱前衍生,以优化待测物在反相色谱柱上的分离,选择合适的内标建立内标法定量以减少共流出带来的基质效应. 结果 本研究中 9 种氨基酸及 2 种内标化合物在表 1 所示的流动相条件下实现 10 分钟内良好分离(图 1),各个氨基酸待测物的校准曲线、线性范围、相关系数及灵敏度见表 2.应用小鼠肝组织作为 QC 样品考察加标回收率,各待测氨基酸回收率在 90%-110%之间,日内标准差<5%,日间标准差<8%.结论 本研究建立的方法分析速度快,准确性高,回收率和稳定性好,灵敏度满足微量样本的检测需求,可以应用于多个代谢产物与疾病相关性的表观遗传学研究.
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