MLL2在B细胞淋巴瘤中的表达及调控机制研究

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目的:讨论混合谱系白血病2(MLL2)基因在B细胞淋巴瘤中的表达趋势及其在淋巴瘤形成过程中所起的影响。方法:随机收集2008年至今年我院所收治经病理证实的B细胞淋巴瘤患者病理切片37例,滤泡细胞淋巴瘤(FL)18例、弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)15例,及作为对照的反应性增生淋巴结(RHL)4例,应用MLL2抗体行免疫组织化学染色。利用免疫反应积分(IRS)法评价免疫组化结果,比较各类B细胞淋巴瘤中MLL2蛋白的表达情况。利用RT-PCR及Western blot技术检测MLL2蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株(Dohh-2)中的表达情况,并用MLL2 siRNA抑制Dohh-2中该基因的表达,利用流式细胞术检测MLL2siRNA转染后细胞的调亡、细胞周期,RT-PCR检测转染前后VEGF mRNA、β-catenin mRNA的表达程度。统计学方法:选用SPSS 16.0软件,单因素方差分析。判别标准:P<0.05有统计学意义。结果:免疫组化结果表明B细胞淋巴瘤的肿瘤组织病理切片中,MLL2蛋白这一在细胞核内表达的蛋白,在细胞核外表达增多。随着肿瘤恶性度的增加弥漫大B细胞淋巴瘤中所检测到的MLL2蛋白量以及MLL2蛋白核外移现象明显多于滤泡淋巴瘤和反应性增生,且染色强度逐渐加深。所有病理切片中,血管内皮细胞及平滑肌细胞均见染色。RT-PCR及western blot方法均可以在Dohh-2细胞株中检测到MLL2的表达,且MLL2 siRNA转染后可检测到MLL2 mRNA表达水平显著下降。MLL2 siRNA转染后,诱导淋巴瘤细胞凋亡,并使细胞周期停滞于G0/G1期。6.MLL2 siRNA转染后,VEGF mRNA、β-catenin的表达明显减少,而阴性对照组则没有上述效应。结论:在B细胞淋巴瘤中,表达于细胞核的MLL2蛋白,随肿瘤的发生逐渐发生核外移,表明MLL2蛋白可能在B细胞淋巴瘤的发生发展过程中起一定作用。MLL2蛋白在DLBCL中核外移增多且细胞浆中比FL细胞浆中表达增多,DLBCL是侵袭性淋巴瘤,而FL是惰性淋巴瘤,提示MLL2蛋白的表达可能与B细胞淋巴瘤的恶性程度成正相关。在B细胞淋巴瘤还是反应性增生组织中发现了MLL2蛋白在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞中的表达,说明MLL2可能与血管的生成密切相关。转染MLL2 siRNA24小时,检测MLL2 mRNA的表达水平,发现了其明显的表达下降。同时在转染MLL2 siRNA 24小时后,检测到VEGF mRNA表达减低,提示MLL2的促血管生成作用是与VEGF相互作用达到的。转染MLL2 siRNA24小时后Dohh-2细胞调亡略有增多,细胞周期G0/G1期阻滞增加,表明MLL2蛋白有抗调亡作用并且可以促进细胞的生长。
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