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研究背景和目的 :青藤碱(sinomenine, SIN)是中药青风藤的主要活性成分。α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)是SIN抗炎作用的重要靶点。腺苷受体A2A具有抗炎和免疫抑制作用。A2A与类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)发病进程的关系以及SIN的影响尚未明确。本研究采用大鼠佐剂性关节炎(Adjuvant-induced arthritis,AA)模型,分析A2A表达变化与发病进程的关系及SIN的作用;进一步研究SIN对成纤维样滑膜细胞(FLS)发挥抗增殖、抗炎作用中对A2A表达的影响及其与靶向α7nAChR的关系,为阐明SIN抗关节炎机制提供实验依据。研究方法 :1.AA模型发病进程中A2A表达变化及SIN的影响建立大鼠AA模型,分组为对照组、模型组,SIN组(120mg/kg/d),灌胃给药。Western blot检测不同时间点(第0、12、18、24、30d)滑膜、肝脏等组织中A2A表达变化。2.SIN对FLS中A2A表达的影响TNF-α和LPS刺激FLS诱导体外增殖和炎症模型,MTT法检测细胞增殖、ELISA检测上清中MCP-1和IL-6,免疫荧光、RT-PCR、WB观察FLS中A2A表达变化和SIN的影响。采用α-BTX拮抗α7、siRNA沉默α7nAChR,观察SIN对FLS的增殖、炎症反应和A2A表达变化的影响。研究结果 :1.A2A表达与关节炎指标负相关,SIN上调A2A表达模型组滑膜和肝脏中A2A蛋白表达呈现出先降低后逐渐升高的动态变化,18d为大鼠AA模型炎症最高峰,A2A蛋白表达最低,与RA病程发展呈负相关。与模型组对比,SIN能明显升高A2A表达。2.SIN作用于FLS中α7nAChR调节A2A表达免疫荧光结果显示,TNF-α和LPS刺激能明显降低A2A表达,SIN升高A2A表达;TNF-α组A2A mRNA表达降低,与TNF-α组相比,SIN组(200μM和400μM)A2A表达升高;α7nAChR特异性拮抗剂或α7nAChR沉默后,SIN对A2A的上调作用明显减弱。α7nAChR沉默明显减弱了SIN对MCP-1和IL-6的抑制作用。结论 :A2A与大鼠AA模型发病进程呈负相关,青藤碱发挥抗关节炎作用并上调A2A表达。SIN通过作用于α7nAChR抑制FLS释放炎症因子、上调A2A表达,从而发挥抗炎作用。