【摘 要】
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目的：构建含有分子内佐剂ctB的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶双亚基多表位DNA疫苗(pVAX1-ctB-ureI-ureB,以下简写为BIB),评价其作为DNA疫苗的保护效果.
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,四川成都,610041
【出 处】
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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
论文部分内容阅读
目的：构建含有分子内佐剂ctB的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶双亚基多表位DNA疫苗(pVAX1-ctB-ureI-ureB,以下简写为BIB),评价其作为DNA疫苗的保护效果.方法：在分析H.pylori定植关键分子尿素膜通道蛋白UreI (Urease I)和尿素酶催化亚基UreB (Urease B)免疫表位基础上,设计出含两个蛋白优势抗原表位的核酸序列(ureI-B),在ureI-B序列的N端接入佐剂基因ctB,构建真核表达质粒BIB.将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1/BIB转染293T细胞,用RT-PCR方法和细胞免疫荧光技术分析融合基因片段的表达情况.20只BALB/c小鼠随机均分为2组,在BIB DNA疫苗肌肉注射免疫后第5周对小鼠施以H.pylori SS1菌株连续3次灌胃攻击.攻击后第35天,分别用PCR法、免疫组化法、组织HE染色病理分析法对小鼠胃黏膜进行H.Pylori感染情况分析.结果：重组质粒BIB的酶切鉴定、PCR结果分析、测序结果分析显示与预期100％一致.BIB质粒DNA转染293细胞后在转录水平证明了融合基因能在293T细胞中表达,荧光免疫分析显示表达在细胞质中,小鼠胃黏膜PCR检测、免疫组织化学检查、组织HE染色病理分析及胃炎评分结果提示BIB DNA疫苗对H.pylori攻击感染有保护作用,保护率为87.5％.结论：成功构建含分子内佐剂ctB的H.Pylori DNA疫苗BIB,动物实验证实肌肉注射该DNA疫苗能对H.pylori SS1引起的感染产生有效免疫保护性.
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