犬IL-31受体的多克隆抗体的制备及其治疗效果的评估

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犬特应性皮炎是犬最常见的过敏性皮肤病,以瘙痒、皮肤炎症为主要特征,组织病理表现为皮肤过度角质化,T细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润。最近发现的细胞因子白介素-31 (IL-31)已被证明在瘙痒诱导过程中具有很重要的作用。IL-31信号通过一个由IL-31受体α(IL-31R)和抑瘤霉素M受体组成的异二聚体传递。本研究的目的是制备抗犬IL-31R多克隆抗体,并评估其对CAD模型犬抑制瘙痒的效果。首先建立了犬特应性皮炎的模型,对151只年龄为6月到3岁的比格犬采血进行IgE浓度的检测,筛选出高IgE的比格犬,对筛选的犬进行粉尘螨皮试,最终选取12只阳性犬作为造模犬。随机分为实验组(n=9)和对照组(n=3),实验组将粉尘螨(浓度400mg·mL-1)以0.3ml/只剂量涂抹在犬腋窝和腹股沟处,每周2次,共12周;对照组将生理盐水以0.3ml/只剂量涂抹在腋窝和腹股沟处,每周2次,共12周。造模结束后,每晚8点,对实验组和对照组录制2小时视频,连续8d,统计瘙痒得分,并对两组犬进行皮肤病理切片。用BL21 (DE3)大肠杆菌表达重组IL31R蛋白,纯化蛋白后作为免疫原,免疫犬(剂量为10μg·kg-1,每15天免疫一次,共4次),于最后一次免疫周期结束后第10d,收集血清。选取5段IL-31R序列上膜外的配体结合位点处的短肽,分别进行合成,偶联BSA后做免疫原,免疫犬(浓度1mg·mL-1,每次100μL,每15d免疫一次,共4次),于最后一次免疫周期结束后第10天,收集血清。将6种纯化的血清以5.0 mg·kg-1的剂量静脉注射6只CAD模型犬,另外3只CAD模型犬以5.0 ml·kg-1的剂量静脉注射生理盐水。每晚8点,对实验组和对照组录制2小时视频,连续8d,统计瘙痒得分。造模结果发现实验组的瘙痒得分显著高于对照组,且实验组皮肤的嗜酸性粒细胞和肥大细胞的数量显著高于对照组,这表明CAD模型造模成功。治疗效果评估结果显示,用制备的血清治疗的CAD模型犬的癌痒得分均显著低于用生理盐水治疗的CAD模型犬的瘙痒得分。因此,本研究结果表明犬源化的抗犬IL-31R多克隆抗体可能通过与天然的IL-31R竞争性结合IL-31,阻断瘙痒通路,显著减少了特应性皮炎犬的瘙痒行为。
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