【摘 要】
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目的 建立鉴别定量酵母来源重组人血白蛋白(rHSA)成品中宿主残留蛋白(HCPs)的2D-LC-MS-MS 方法 方法 稀释后的样品变性后经二硫苏糖醇还原,碘乙酰胺封闭巯基,使用胰蛋白酶酶切.分离模块采用Waters Aquity UPLC 2DM-Class,分离柱选择XBridge peptide BEH C18 300(A)5μm1.0mm*5mm 及AquityUPLC M-Class C
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,北京,100010
【出 处】
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2017年中国药学大会暨第十七届中国药师周
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目的 建立鉴别定量酵母来源重组人血白蛋白(rHSA)成品中宿主残留蛋白(HCPs)的2D-LC-MS-MS 方法 方法 稀释后的样品变性后经二硫苏糖醇还原,碘乙酰胺封闭巯基,使用胰蛋白酶酶切.分离模块采用Waters Aquity UPLC 2DM-Class,分离柱选择XBridge peptide BEH C18 300(A)5μm1.0mm*5mm 及AquityUPLC M-Class CSH Column 1.7μm 130 (A),1mm*150mm,质谱采用Synapt G2-SiHDMS,液相一维使用20mM 甲酸铵100％乙腈为流动相,二维使用0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液为流动相.质谱采用正离子,高分辨,UDMSe 模式.以兔糖原磷酸化酶(PHO),采用HI3 进行定量.采用PLGS 软件匹配来自uniprot的酵母蛋白质组序列 结果 鉴定到HCP 的肽段FEEAVSK,并对肽段的二级碎片进行确认.肽段所属蛋白在uniprot 编号为C4R8K6,蛋白浓度为24.6ppm.
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