【摘 要】
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细胞高密度培养是乳酸菌发酵剂生产的客观要求,然而,细胞密度因菌体非可培养状态的影响而无法提高.因此,掌握菌体生长生理状态对高密度培养的调控具有重要作用.本文利用分子定量方法就保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)分批培养过程中的非可培养生理状态动态分布进行了研究.首先通过构建16S rRNA 单拷贝质粒,获得聚合酶链式反应(qPCR)定量的标准曲线,所得曲线R2 ＝0.9998；随后考察了溴化
【机 构】
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哈尔滨工业大学化工学院 哈尔滨 150090 中国海洋大学食品学院 山东青岛 266003
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细胞高密度培养是乳酸菌发酵剂生产的客观要求,然而,细胞密度因菌体非可培养状态的影响而无法提高.因此,掌握菌体生长生理状态对高密度培养的调控具有重要作用.本文利用分子定量方法就保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)分批培养过程中的非可培养生理状态动态分布进行了研究.首先通过构建16S rRNA 单拷贝质粒,获得聚合酶链式反应(qPCR)定量的标准曲线,所得曲线R2 ＝0.9998；随后考察了溴化丙锭-定量聚合酶链式反应(PMA-qPCR)方法对死活菌辨别的准确性,获得针对L.bulgaricus 的分子定量检测方法；最后对分批培养的L.bulgaricus 菌体生理状态进行定性定量检测.结果发现,分批培养中非可培养状态包括：活性不可培养(VNBC)、膜损伤及裂解等.其中,裂解细胞因游离DNA"消失"无法准确定量；VNBC 细胞在稳定早期就已经存在,其相对未裂解细胞的相对丰度从0.23 到0.39 不断增加；损伤细胞相对丰度在稳定期前增长至0.3,但最后下降至0.12.本研究发现了导致L.bulgaricus 菌体可培养性减弱的生理状态及其动态变化,为高密度细胞培养的改善提供了依据.
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