【摘 要】
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根据三角帆蚌(Hyriopsis cumingi)消减杂交cDNA文库获得的EST序列,运用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得三角帆蚌细胞色素P450 (cytochrome
【机 构】
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湖南农业大学水生生物学实验室,长沙410128
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根据三角帆蚌(Hyriopsis cumingi)消减杂交cDNA文库获得的EST序列,运用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得三角帆蚌细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)基因的全长cDNA序列,全长1978 bp,开放阅读框1533 bp,编码510个氨基酸；氨基酸序列分析表明其含有CYP基因家族所特有的保守性功能位点“EXXR”、“PERF”和血红素结合基序“FXXGXXXCXG”.研究采用半定量RT-PCR (Semi-quantitative RT-PCR)方法分析三角帆蚌个体经嗜水气单胞菌(Aeromonase hydrophila)感染后开始出现明显病理症状时,CYP基因在肝脏、肠、性腺、胃、肾脏、斧足、心脏、外套膜、鳃和闭壳肌10种组织中的表达规律,结果表明：CYP基因在对照组个体各个组织中都有表达,单因素方差分析表明外套膜与性腺以外的8种组织表达差异显著(P＜0.05),胃与斧足和肠以外的7种组织表达差异显著(P＜0.05),其它表达差异不显著(P＞0.05)；经病原菌感染后,CYP基因在各个组织中仍有表达,单因素方差分析表明肝脏和肠表达差异不显著(P＞0.05),但与其它8种组织表达差异显著(P＜0.05),闭壳肌与其它9种组织表达差异都显著(P＜0.05)；两独立样本T检验分析表明病原菌感染后,相对对照组而言,CYP基因在外套膜中的表达量显著降低(P＜0.05),在胃、肾脏、斧足、心脏、鳃和闭壳肌中的表达量极显著降低(P＜0.01),在肝脏、肠和性腺中的表达差异不显著(P＞0.05),但表达量都有所降低.这可能说明三角帆蚌出现明显病理症状时,CYP基因的表达受到抑制,导致免疫系统受损,从而说明CYP可能与贝类的免疫反应具有一定相关性.
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