【摘 要】
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M蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)编码的病毒蛋白中含量最为丰富且高度保守的一种非糖基化膜相关蛋白,在NDV整个感染周期中扮演着重要的角色.M蛋白在病毒
【机 构】
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扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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M蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)编码的病毒蛋白中含量最为丰富且高度保守的一种非糖基化膜相关蛋白,在NDV整个感染周期中扮演着重要的角色.M蛋白在病毒感染早期大量聚集在细胞核和核仁中,不仅持续抑制宿主细胞基因的转录和翻译,还可调控病毒基因组的复制和转录；在病毒感染后期进入细胞质,协助子代病毒粒子的出芽和释放.但是目前对M蛋白的核仁定位机制、与核仁蛋白的相互作用及其对病毒的复制影响还不清楚.核仁素、核仁纤维蛋白和核磷蛋白B23是核仁中含量丰富且研究深入的三个蛋白,可介导蛋白的核仁定位并与具有核仁定位特性的病毒蛋白发生相互作用促进病毒的复制.本研究首先通过酵母双杂交方法在酵母体内证实核磷蛋白B23与M蛋白发生相互作用,并进一步通过GST pull-down、免疫共沉淀和荧光共定位证实两者的互作.对两个蛋白截短表达鉴定彼此相互作用结构域,发现B23蛋白通过其核酸结合结构域的aa188-245与M蛋白相互作用；M蛋白通过aa30-60与B23蛋白相互作用,同时该结构域介导M蛋白的核仁定位.此外,通过RNA干扰方法抑制DF1细胞内B23蛋白的表达或在DF1细胞内过表达B23蛋白均能显著抑制NDV的复制效率.以上结果证实,M蛋白通过其核仁定位信号基序结合B23蛋白进入核仁,并在核仁内持续破坏B23蛋白的结构与功能促进NDV的复制.
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