【摘 要】
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目的:探讨淫羊藿甙体外抑制SIV复制作用和抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡的信号转导机制.方法:细胞病变和间接免疫荧光法测定了淫羊藿甙对SIV复制的抑制作用,Annexin V和Propidiumiodide(PI)双染法测定淫羊藿甙对SIV感染导致CEMx174细胞凋亡的作用,放免法测定了SIV感染CEMx174细胞内cAMP含量和依赖cAMP的蛋白激酶活性,Western blott
【机 构】
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广州中医药大学热带医学研究所,广州,510407 广州医学院检验系
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目的:探讨淫羊藿甙体外抑制SIV复制作用和抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡的信号转导机制.方法:细胞病变和间接免疫荧光法测定了淫羊藿甙对SIV复制的抑制作用,Annexin V和Propidiumiodide(PI)双染法测定淫羊藿甙对SIV感染导致CEMx174细胞凋亡的作用,放免法测定了SIV感染CEMx174细胞内cAMP含量和依赖cAMP的蛋白激酶活性,Western blotting法测定了PKA依赖的组蛋白磷酸化的水平.结果:用不同浓度的淫羊藿甙处理细胞后结果表明,其半数毒性浓度为134ug/ml,半数抑制浓度是26ug/ml,治疗指数为5.15.淫羊藿甙对感染细胞凋亡的抑制要比正常细胞显著为高(P＜0.05).50μg/ml淫羊藿甙作用病毒感染细胞15min后显著降低正常和感染细胞内的cAMP含量,但对感染细胞的cAMP含量影响更加显著.50μg/ml淫羊藿甙可以显著下调感染和正常细胞的PKA活性(P＜0.05).采用Western blotting法测定了PKA依赖的组蛋白磷酸化的水平.病毒感染可以使磷酸化的组蛋白-H3升高,50μg/ml淫羊藿甙作用2h后,可以显著降低磷酸化组蛋白-H3的水平.结论:SIVmac251感染导致的细胞凋亡是cAMP-PKA信号转导通路激活的结果,而短时间淫羊藿甙处理SIVmac251感染的CEM x174细胞可以暂时减缓SIVmac251诱导的细胞凋亡过程.
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