【摘 要】
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霜霉病是黄瓜栽培中最为严重的常发性、流行性卵菌病害,其危害严重,加强对黄瓜霜霉病抗性分子机理研究,对于黄瓜无公害生产及抗病分子育种具有重要意义.本研究在对黄瓜霜霉菌侵染后抗病种质NW088转录组学研究的基础上,以高抗种质NW088和易感种质CCMC二叶期的幼苗为试材,对CsPI(蛋白酶抑制剂)、CsTLP(类甜味蛋白)和CsHIRP(过敏性诱导反应蛋白)在黄瓜霜霉病抗性中的作用进行了初步研究.利用
【机 构】
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西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100
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霜霉病是黄瓜栽培中最为严重的常发性、流行性卵菌病害,其危害严重,加强对黄瓜霜霉病抗性分子机理研究,对于黄瓜无公害生产及抗病分子育种具有重要意义.本研究在对黄瓜霜霉菌侵染后抗病种质NW088转录组学研究的基础上,以高抗种质NW088和易感种质CCMC二叶期的幼苗为试材,对CsPI(蛋白酶抑制剂)、CsTLP(类甜味蛋白)和CsHIRP(过敏性诱导反应蛋白)在黄瓜霜霉病抗性中的作用进行了初步研究.利用实时荧光定量PCR,分析了它们在霜霉菌侵染后不同时间点抗感种质间的表达变化,结果表明,霜霉菌侵染后,抗病种质叶片中CsPI、CsTLP和CsHIRP基因的表达在互作前期(接种后1和2d)显著高于感病种质,其表达量分别是感病种质的4.66、6.29；6.56、2.66和6.03、7.70倍；为了进一步研究这三种蛋白在霜霉病抗性中的作用,分别构建了其相应的原核表达载 体,并转入BL21(DE3)中,确定了它们各自的IPTG最适诱导表达条件.大量诱导表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳后切胶回收目的条带,制备这三种蛋白的多克隆抗体.对制备的CsHIRP的多克隆抗体进行了Western blotting检测,结果表明,在感病种质CCMC的叶片中,没有检测到CsHIRP的表达,而在抗病种质NW088中,霜霉菌侵染前和侵染后的不同时间,叶片CsHIRP的表达量并无明显变化,与转录水平的表现并不一致.
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