【摘 要】
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目的 预测并鉴定肝素酶(heparanase)蛋白B细胞表位免疫原性。方法 以肝素酶蛋白的氨基酸序列为基础,采用DNAStar分析软件以及Bcepred在线二级结构分析工具分析其蛋白二级结构并预测B细胞表位。根据预测结果,采用8分支多抗原肽结构合成针对该表位的抗原肽,将后者与通用型T辅助表位人白细胞介素-1 β线性短肽(VQGEESNDK,氨基酸163-171)联合免疫白毛黑眼兔,检测免疫血清效价
【机 构】
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浙江省人民医院消化内科、浙江省胃肠病学重点实验室 杭州市 310014
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目的 预测并鉴定肝素酶(heparanase)蛋白B细胞表位免疫原性。方法 以肝素酶蛋白的氨基酸序列为基础,采用DNAStar分析软件以及Bcepred在线二级结构分析工具分析其蛋白二级结构并预测B细胞表位。根据预测结果,采用8分支多抗原肽结构合成针对该表位的抗原肽,将后者与通用型T辅助表位人白细胞介素-1 β线性短肽(VQGEESNDK,氨基酸163-171)联合免疫白毛黑眼兔,检测免疫血清效价,鉴定其特异性和免疫源性。结果 软件预测显示,肝素酶蛋白大亚基的第1-15位(MAP1)、第279-293位(MAP2)及175-189位(MAP3)氨基酸最可能为其优势B细胞表位。间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹及免疫组化分析,证实MAP1、 MAP2及MAP3均能诱导机体产生高滴度抗体,但仅MAP1、MAP2抗体具有高特异性,仅MAP2具有肝癌组织强表达。结论 肝素酶大亚基的第1-15位、第279-293位氨基酸为其优势B细胞表位,其中第279-293位氨基酸的免疫原性最强,这为制作B细胞优势短肽疫苗提供了理论依据。
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