杜氏盐藻Dunaliella salina硝酸盐还原酶cDNA片段的克隆与分析

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目的:获得杜氏盐藻Dunaliella salina硝酸盐还原酶cDNA片段。 方法:根据Dunaliella tertiolec-ta、衣藻、团藻等生物硝酸盐还原酶nitrate reductase,NR高度保守序列EGWWEKP、WNVMGMM设计一对简并引物,以含硝酸盐培养基培养的的盐藻cDNA为模板,进行PCR扩增,产物经T-A克隆转化至Jm109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析。 结果:在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为381bp,编码127个氨基酸。推导的氨基酸序列与下列物种的硝酸盐还原酶进行同源性比较:Dunaliella tertiolecta为88.2%,团藻为78%,衣藻为67%,小球藻为59%。并在Genbank进行Search for short nealy exact matches,结果显示所扩增片段的蛋白质为Mo-Co_dimer结构,符合硝酸盐还原酶的结构特征。 结论:所克隆的序列为盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。
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