目的 为了比较人外周血单个核细胞(PBMC)中NK细胞经体外扩增与活化前后的活性以及为了初步观察肿瘤患者NK细胞扩增后的应用效果。方法 首先,采集健康人PBMC,对其中的NK细胞进行扩增与活化。对扩增活化前后的NK细胞在表面受体表达水平、杀伤肿瘤细胞的活性及ADCC活性等方面进行了比较。随后,分别采集10例肿瘤患者(肝癌3例、肺癌3例、卵巢癌2例、直肠癌2例)的外周血100ml,分离PBMC,体外扩增NK细胞。结果 扩增后的健康人NK细胞其ADCC活性提高了32％；对四种肿瘤细胞：K562、A549、7721和MCF细胞的杀伤活性分别提高了19％、29％、26％和28％；进一步研究证实,体外扩增的健康人NK细胞,其活化性受体NKG2D、CD94、NKp46、NKp30和NKp44的阳性率分别提高了60％、40％、20％、40％和63％；抑制性受体CD158b、NKB1和NKAT的阳性率无明显变化。此外,在NK细胞体外扩增过程中,当添加免疫活性短肽"TKD"时,可使NK的杀伤活性进一步提高约10％。对肿瘤患者的NK细胞进行扩增和活化后,发现NK细胞的平均纯度可达到90％以上,针对K562的杀伤活性提高17％以上。肿瘤患者回输扩增的自体NK细胞后,均未出现不良反应。其中8例肿瘤患者在NK细胞回输后症状有所改善,其治疗效果正在进一步观察与评价中。结论 相对于静息NK细胞,经本方法体外扩增后的NK细胞得到了明显的活化,抗肿瘤活性明显提高。该方法同样适用于肿瘤患者NK细胞的扩增和活化,且可满足临床治疗的需求。