【摘 要】
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荧光素酶(Luciferase)报告基因系统广泛应用于研究细胞因子转录水平调控,但在禽病研究中的应用却起步较晚。本研究构建了鸡Ⅰ型干扰素启动子及其上游调控因子(IRF3和 NF-κB)荧光素酶报告质粒,通过转染DF-1细胞(鸡胚成纤维细胞),检测在 poly(I∶C)刺激情况下的荧光素酶活性,并进一步用qRT-PCR(实时荧光定量PCR)方法进行了验证,结果表明构建的报告质粒能很好的反映出鸡Ⅰ型干
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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荧光素酶(Luciferase)报告基因系统广泛应用于研究细胞因子转录水平调控,但在禽病研究中的应用却起步较晚。本研究构建了鸡Ⅰ型干扰素启动子及其上游调控因子(IRF3和 NF-κB)荧光素酶报告质粒,通过转染DF-1细胞(鸡胚成纤维细胞),检测在 poly(I∶C)刺激情况下的荧光素酶活性,并进一步用qRT-PCR(实时荧光定量PCR)方法进行了验证,结果表明构建的报告质粒能很好的反映出鸡Ⅰ型干扰素的转录水平。此外,确定了转录调控因子IRF3对Ⅰ型干扰素的转录调控情况以及与鸡IFN-α启动子的结合位点。研究结果表明:本研究成功地建立了鸡IFN-α、IFN-β、IRF3与p50(NF-κB)启动子荧光素酶报告基因检测系统,能用于禽类I 型干扰素免疫应答的检测,为研究Ⅰ型干扰素的抗感染作用提供了检测手段。
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