【摘 要】
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目的 评价金黄色葡萄球菌多药耐药主动外排蛋白QacAα-螺旋1、2及TMS1上的氨基酸对于底物转运的重要性。方法 半胱氨酸定点诱变的方法突变I2,S3,F4,F5,T6,K7, D10, M11, R17, W18, T19, A20, V21, V22, V23, F29, D34, P43, E48, E50, P51和Q55,测序确定突变后,测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
【机 构】
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重庆市传染病寄生虫病学重点实验室,重庆医科大学附属第一医院,重庆400016 教育部感染病分子生物
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目的 评价金黄色葡萄球菌多药耐药主动外排蛋白QacAα-螺旋1、2及TMS1上的氨基酸对于底物转运的重要性。方法 半胱氨酸定点诱变的方法突变I2,S3,F4,F5,T6,K7, D10, M11, R17, W18, T19, A20, V21, V22, V23, F29, D34, P43, E48, E50, P51和Q55,测序确定突变后,测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),然后进行运输试验和western比较突变前后细菌转运功能和蛋白表达的变化。结果 MIC和MBC分析表明突变株S3,F4,F5,T6,R17,T19,A20,F29,E50,P51对所测药物完全恢复敏感性或耐药性明显降低,运输实验结果与MIC,MBC结论一致,提示这1 0株突变株失去对底物的转运能力。蛋白印迹实验显示S3,F4,F5,T6,R17,T19,A20,F29,E50,P51蛋白表达量与阳性组比较无明显差异,提示这1 0株细菌突变后其蛋白质表达量无明显差异。结论 QacA蛋白a-螺旋1、2及TMS1上的10个氨基酸可能与底物的结合和转运功能密切相关。
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