【摘 要】
:
目的:以魔芋葡甘聚糖(KGM)微球为基质,用1,4-丁二醇二缩水甘油醚将KGM微球活化,将胶原蛋白覆层到微球上并对胶原层进行交联,制备覆层均匀、稳定的微载体.考察偶联条件对胶原层的影响以及微载体细胞培养效果的影响.方法:以直径为160-212μm、粒径均一的KGM微球为基质,采用具有无抗原性、生物相容性好等优点的胶原蛋白进行覆层微球,建立两步偶联蛋白的微载体制备方法,系统考察了各因素对微载体制备的
【机 构】
:
北京中医药大学中药学院,北京100102;中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京100190
论文部分内容阅读
目的:以魔芋葡甘聚糖(KGM)微球为基质,用1,4-丁二醇二缩水甘油醚将KGM微球活化,将胶原蛋白覆层到微球上并对胶原层进行交联,制备覆层均匀、稳定的微载体.考察偶联条件对胶原层的影响以及微载体细胞培养效果的影响.
方法:以直径为160-212μm、粒径均一的KGM微球为基质,采用具有无抗原性、生物相容性好等优点的胶原蛋白进行覆层微球,建立两步偶联蛋白的微载体制备方法,系统考察了各因素对微载体制备的影响.以Vero细胞培养效果为评价指标,优化活化时间、蛋白用量、偶联时间、交联剂用量,获得最佳制备工艺.
结果:考察了偶联条件对微载体表面细胞培养效果的影响,获得了微载体的最佳制备工艺:活化时间为4h、胶原蛋白用量为1g:0.1g(球:蛋白)、偶联时间为5h、交联剂用量为1g:0.5 mL(球:交联剂),微载体蛋白偶联量为1.16% (w/w),静态培养最大细胞密度可达1.7×106 cells/mL,培养效果优于常用的微载体Cytodex 3。采用胰蛋白酶处理可有效将培养的细胞从微载体表面解离,微载体与细胞分离简单,活性细胞回收率高。
结论:证明表面偶联胶原蛋白的KGM微球是一种具有应用前景的胶原覆层型微载体。获得微载体制备工艺具有制备工艺周期短、成本低、利于工业放大等优点,活性细胞回收率高等优点。
其他文献
为加速长骨牵张成骨(DO)过程中新骨的形成、矿化及塑型改建,将具有特异性促进成骨分化及矿化的NELL1因子应用于大鼠股骨牵张成骨模型,通过改进外固定架系统实现动态Micro-CT观察,研究NELL1因子对股骨牵张成骨的影响,探索快速有效治疗四肢大段骨缺损的方法.取30只SD大鼠应用自行研制的DO外固定架系统制备股骨DO模型,自术后第8天开始以0.25mm/12h的速度延长14天,共延长7mm.术后
骨组织工程与再生医学技术已在临床中取得一定的成功,然而该技术目前还是处于使用自体细胞进行"个体化"治疗的阶段,无法在临床实践中大规模推广.研发基于同种异体细胞的"通用化"骨组织工程可有效满足中国因机动车剧增和人口老龄化带来的日益增长临床需求.经过多年的研究工作,已初步建立了一套涵盖种子细胞、支架材料、生物反应器、干细胞扩增技术及生物影像学几方面的较完整的"通用化"骨组织工程技术体系.骨组织工程技术
目的:探讨诱导多能干细胞体内外分化残留特性,评估其作为组织工程种子细胞的致瘤性风险.方法:小鼠Oct-4-GFP诱导多能干细胞(iPSCs)体外类胚体分化20天或者裸鼠皮下注射6-8周形成畸胎瘤后消化打散,重新给予诱导多能干细胞常规培养液培养.观察类胚体或者畸胎瘤中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光检测和观察类胚体和畸胎瘤中残留细胞表面标志物及体内外再次分化能力.将残留细胞扩增后注入裸鼠皮下
目的:在体外寻找一个有利于肝细胞生长与功能维持的细胞外基质微环境成为目前肝脏组织工程研究的焦点.通过灌注法制备猪全肝脱细胞化生物支架(decellularize pig liver biological scaffold,DLBS),并进行初步的表征鉴定,为肝脏组织工程提供临床可应用的新型支架材料.方法:采用1% Triton X-100联合0.1%氨水门静脉灌注法制备脱细胞化猪全肝脏生物支架,并
生物反应器是组织工程椎间盘体外培育的关键设备,其技术的不断发展和完善为组织工程椎间盘的体外培育提供了更广阔的技术平台.自行研制了一种智能化组织工程仿生培育系统,在这个系统中气-液和液-液组合式交换器是一个重要组成部分,该交换器主要是根据肺膜交换原理和肾过滤原理,并应用中空纤维半透膜制成的.本次实验目的就是针对交换器的性能进行检测,继而为整个生物反应器的构建和后续实验提供主要理论和条件支持.整个组合
电纺丝作为一种简单而且直接制备超细聚合物纤维的方法,无论研究或是应用都用是充满活力的领域.从1902年W.J.Morton和J.F.Cooley等人在美国分别公开专利以来却一度沉寂.直到上世纪90年代,美国Akron大学的D.H.Reneker等研究者作出大量开创性工作,极大的促进了这一领域的发展.截止到2012年1月,静电纺丝的学术研究已经发表文献2万多篇.早期大多集中研究于研究纺丝体系、工艺参
构建适合种子细胞生长分化及功能表达的生长条件及生存微环境是组织修复材料设计、制备的关键,相对人工合成材料,天然细胞外基质具备多种生物活性成分,包括Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、纤维连接蛋白、粘连蛋白、弹性蛋白和大分子的蛋白聚糖等,以及与体内微环境相似的三维结构和柔韧性,在组织再生方面具备很大的优势.尝试借助材料技术手段,利用细胞在水凝胶体系中的生长特性,在体外构建出类似天然细胞外基质的结构材料,使之成为具备
目的:对于大面积烧伤病人,自体皮肤移植皮源不足和异体皮肤移植中的免疫排斥反应给患者的救治带来了极大不便.聚合物基人工皮肤具有材料来源广泛,价格低廉,组织相容性好等优点,是一种快速有效保护伤口的重要方法.尝试制备多孔硅橡胶薄膜做为人工皮肤,防止体液的过度流失和外界细菌的感染,进而促进伤口的愈合.方法:利用溶剂挥发诱导相分离法制备厚度和孔径可调的多孔硅橡胶膜.对多孔硅橡胶薄膜的孔结构进行了扫描电镜观察