【摘 要】
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在已知宇佐美曲霉E001菌株木聚糖酶Xyn II cDNA序列(Genbank登录号为DQ114485)的基础上,合成1对引物(含EcoR I和Sal I酶切位点),以重组质粒pUCm-T-xyn II为模板,扩增得到编码
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在已知宇佐美曲霉E001菌株木聚糖酶Xyn II cDNA序列(Genbank登录号为DQ114485)的基础上,合成1对引物(含EcoR I和Sal I酶切位点),以重组质粒pUCm-T-xyn II为模板,扩增得到编码Xyn II成熟肽的cDNA片段(555bp)。将其与表达质粒pET-28a连接,构建了重组表达质粒pET-28a-xyn II,转化E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,获得重组工程菌BL21(DE3)/xylanase。研究了以IPTG和乳糖作为诱导剂时重组蛋白的表达规律。在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间和诱导培养温度对目标蛋白表达的影响。实验结果表明,乳糖作为诱导剂时,重组菌产酶活力33.9U/mg略高于IPTG作为诱导剂时重组菌产酶活力28.10U/mg,这为乳糖作为诱导剂应用于重组大肠杆菌生产木聚糖酶提供了参考依据。
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