【摘 要】
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目的：探讨胎鼠大脑皮质源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外培养,并对培养的细胞进行鉴定,分别考察人参皂苷Rb1、Rg1对体外培养神经干细胞增殖和分化的影响.方法：分别取孕12-13 d的胎鼠大脑皮质,采用含生长因子的培养基先后以神经球悬浮培养及单层贴壁培养NSCs,观察其生长情况,用NSCs特异性抗原巢蛋白(Nestin)鉴定,NSCs分化诱导后进行微管相关蛋白-2(
【机 构】
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浙江中医药大学附属金华市中医医院康复医学科 澳门大学中药研究国家重点实验室;澳门大学中华医药研究院
【出 处】
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2016年浙江省物理医学与康复学学术年会
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目的：探讨胎鼠大脑皮质源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外培养,并对培养的细胞进行鉴定,分别考察人参皂苷Rb1、Rg1对体外培养神经干细胞增殖和分化的影响.方法：分别取孕12-13 d的胎鼠大脑皮质,采用含生长因子的培养基先后以神经球悬浮培养及单层贴壁培养NSCs,观察其生长情况,用NSCs特异性抗原巢蛋白(Nestin)鉴定,NSCs分化诱导后进行微管相关蛋白-2(Tuj1)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测以分别确认其分化能力.以空白组(去生长因子,control)作为对照组,实验组分别将0.1μM,1μM,10μM三种浓度的人参皂苷Rb1、Rg1与NSCs共培养,48h后,进行5-溴脱氧尿苷嘧啶(Bromodeoxyuridine,BrdU)染色检测,通过荧光免疫细胞化学技术鉴定,对BrdU阳性细胞计数及计算BrdU/DAPI比值,比较两种人参皂苷在不同浓度下对神经干细胞增殖的作用.结果：1.培养的细胞可以扩增生长,Nestin免疫细胞染色均呈阳性；诱导分化后,荧光免疫细胞化学染色显示Tuj1、GFAP标记阳性.3.与空白对照组比较,发现人参皂苷Rb1各组BrdU阳性细胞数目均显著性增加(P＜0.05).人参皂苷Rg1除0.1uM无促进作用外(P＞0.05),其他各组BrdU阳性细胞数目均显著性增加(P＜0.05).3.在促分化实验中,与对照组比较,人参皂苷Rb1组GFAP阳性细胞比例明显增高,证实人参皂苷Rb1可促进NSCs分化为星形胶质细胞(P＜0.05),而在本实验中没有检测到人参皂苷Rg1对NSCs分化为星形胶质细胞有促进作用(P＞0.05)；也未发现人参皂苷Rb1、Rg1对NSCs分化为神经元细胞有促进作用(P＞0.05).结论：采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞经神经球传代及单层贴壁培养后,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs.人参皂苷Rg1、Rb1在体外实验中都可以促进神经干细胞的增殖,10uMRb1能促进NSCs分化为星形胶质细胞,而在本实验中没有检测到人参皂苷10uM Rg1对NSCs分化为星形胶质细胞有促进作用；和对照组比较,未发现人参皂苷Rb1、Rg1对NSCs分化为神经元细胞有促进作用.
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