【摘 要】
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目的 分泌蛋白参与了糖脂代谢、药物运输及肿瘤侵袭等多种生理及病理过程,肿瘤细胞分泌蛋白质组与肿瘤的多重耐药性(MDR)的发生密切相关.研究人肝癌细胞株Bel7402及其多
【机 构】
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重庆市重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 重庆医科大学附属第二医院 400010
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目的 分泌蛋白参与了糖脂代谢、药物运输及肿瘤侵袭等多种生理及病理过程,肿瘤细胞分泌蛋白质组与肿瘤的多重耐药性(MDR)的发生密切相关.研究人肝癌细胞株Bel7402及其多重耐药株Bel7402/5-Fu分泌蛋白质组学的差异,筛选与肝癌MDR发生相关的指标.方法 分别从Bel7402和Bel7402/5-Fu细胞的无血清培养液中分离提取分泌蛋白,运用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记分泌蛋白并进行高分辨率质谱分析,质谱鉴定出的差异蛋白采用western blot进行验证.通过检测RNA干扰后Bel/5-Fu对氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)以及阿霉素等化疗药物敏感性的变化,鉴定差异蛋白与肝癌细胞MDR之间的联系.结果 (1)通过iTRAQ基础上的质谱分析,共鉴定出1780种蛋白质,其中279种具有差异表达,131种蛋白在Bel7402/5-Fu中高表达,56种蛋白低表达.(2) Western blot结果显示,α 2-HS糖蛋白(AHSG)和人血管生成素1 (ANGPT1)在Bel7402/5-Fu分泌蛋白中的表达量较Bel7402升高,人醌NADH脱氢酶1(NQO1)和脂质运载蛋白(LCN2)的表达量较Bel7402明显减低,western blot结果与质谱分析结果相符.(3)分别用3个不同的siRNA序列干扰AHSG在Bel7402/5-Fu中的表达后,用半数抑制浓度(IC50)的5-Fu、DDP以及阿霉素处理48h后,Bel7402/5-Fu的抑制率分别为：5-Fu (85.6％,86.9％,77.9％),DDP (86.3％,90.5％,81.1％),阿霉素(71.1％,78.8％,77.8％).干扰AHSG表达后,Bel7402/5-Fu对氟尿嘧啶、顺铂以及阿霉素的敏感性均有增强.结论 通过iTRAQ标记联合质谱分析技术对Bel7402及其多重耐药株Bel7402/5-Fu分泌组学的比较,筛选出一些差异表达的蛋白,其中AHSG在耐药株细胞中的高表达与肝癌多重耐药性有关.
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