RhoA基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-146a靶向关系的验证

来源 :2015年浙江省中西医结合学会检验医学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gx2784500
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  目的:构建RhoA基因3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)荧光素酶报告质粒,验证miR-146a对RhoA mRNA的靶向作用.方法:通过PicTar据库和miRanda数据库预测可能与RhoA基因3'UTR作用的miRNA;构建RhoA基因3'UTR荧光素酶报告质粒;将重组荧光素酶报告质粒和miRNA模拟物(mimics-miRNA)共转染MDA-MB-231细胞,检测转染后细胞的荧光素酶活性.结果:PicTar数据库和miRanda数据库预测结果显示,miR-146a与RhoA基因3'UTR存在两个互补结合位点;构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;重组质粒和mimics-miR-146a共转染MDA-MB-231细胞后,荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性降低(P<0.01).结论:成功构建了RhoA基因3'UTR荧光素酶报告质粒,初步验证miR-146a对RhoA基因3'UTR的靶向作用关系.
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