目的:针对常规胶原提取方法存在的胶原降解严重,分子量范围宽以及类型均一性差,并导致其应用存在局限性等问题,考察了羟脯氨酸含量对猪皮胶原热稳定性和热变性动力学的影响,研究出一种类型均一、羟脯氨酸含量可控的胶原制备方法. 方法:在40℃条件下采用流动提取的方式从脱脂猪皮中提取胶原,分时取样后并对提取的胶原进行氨基酸组成分析,采用DSC法测定不同羟脯氨酸含量胶原的临界变性温度,并进行热变性动力学分析.在此基础上采用多级逆流提取结合酶解方法提取胶原.采用亲和层析的方法进行胶原蛋白类型分离,利用生物质谱特征多肽法进行胶原的类型识别. 结果:在多级逆流提取过程中，整体上原料和提取的胶原溶液移动方向相反且存在温度梯度，物料停留时间可控。多级逆流固液萃取实验结果表明:与传统方法相比，多级逆流提取方式可以将溶出的蛋白及时移出，避免长时间变性处理导致胶原随机降解。在最佳固液比例、温度及梯度、pH、水相流速以及停留时间的条件下可获得未降解胶原，通过亲和层析法获得了类型均一的Ⅰ型和Ⅲ型胶原。 结论:SDS-PAGE分析结果表明提取出的胶原中不含分子量低于100kDa的组分，a,b和g比例与Sigma样品一致。质谱检测结果表明I型胶原中不含其它类型胶原。