褪黑激素对长毛兔产毛性能及毛囊细胞凋亡的影响

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为了研究褪黑激素对皖系长毛兔夏季产毛量和毛囊细胞凋亡的影响。选择1.5岁、体重和产毛量相似的皖系长毛兔60只(公兔40只、母兔20只),公、母兔均分为4个组。试验开始时,使用电推剪毛采集全身兔毛,颈部皮下埋植不同剂量的褪黑激素(0 mg、25 mg、40 mg和55 mg),试验期为10周,试验时期7-9月。试验结束后测定试验兔产毛量、兔毛(粗毛和细毛)自然伸直长度等性状指标。同时采集背部皮肤组织,一份用10%中性福尔马林缓冲液处理,用于组织病理学观察;一份用液氮冷冻后置于-80℃冰箱,用于RNA-seq分析。主要结果如下:通过埋植褪黑激素发现公兔对照组7-9月剪毛量低于试验前剪毛量,40mg埋植组明显提高产毛量(P<0.05),25mg和55 mg埋植组公兔试验后产毛量高于试验前,但无显著差异。而褪黑激素处理并没有提高母兔的产毛量,但是相比对照组,产毛量下降幅度减少。毛长测定结果表明40 mg埋植组显著增加公兔粗毛长度(P<0.05),而母兔55mg埋植组粗毛长度显著大于其他各组(P<0.05)。但褪黑激素埋植对公母兔细毛长度均没有引起显著变化。对于不同毛型而言,相同性别同一处理组的粗毛长度均极显著大于细毛长度(P<0.01)。HE染色发现随着褪黑激素剂量的增加,长毛兔毛囊结构逐渐完整,分布密集,无萎缩趋势,且55mg褪黑素处理组效果最明显,可有效抑制毛囊细胞的凋亡。TUNEL染色也表明褪黑激素大幅度减弱了细胞凋亡程度。选取对照组和55 mg褪黑素处理组进行RNA-seq,共获得25个差异表达基因。KEGG分析显示坏死性凋亡和铁死亡等信号通路被显著富集,其中6个差异基因参与细胞凋亡通路。通过qPCR进一步验证并获得调控细胞凋亡新的候选基因1个。本研究表明褪黑激素能够提高公兔夏季产毛量,尤其是40mg埋植组显著提高了公兔夏季产毛量;而母兔可能由于产毛量高,受夏季热应激影响较大,对褪黑激素处理不是特别敏感,因此所用药物种类或褪黑激素剂量有待进一步研究。同时,皮下埋植40mg或55mg褪黑激素显著增加了公母兔粗毛长度(P<0.05),而对细毛并没有显著影响;研究表明皮下埋植40mg和55mg褪黑激素,能够增加皖系长毛兔粗毛长度但对细毛长度无明显影响,而褪黑激素对兔毛长度的影响可能具有剂量、性别及品种效应。HE和TUNEL染色均表明55 mg褪黑激素处理能有效抑制毛囊细胞凋亡、维持细胞正常形态。因此,本试验通过对55 mg处理组和对照组测序获得了调控长毛兔毛囊细胞凋亡的信号通路和新的候选基因。本研究可为褪黑激素的合理利用提供参考,并初步揭示了褪黑激素促进长毛兔夏季兔毛生长的作用机制。
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