Sirt1保护局灶节段肾小球硬化足细胞的作用及机制

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rainbow_qu2009
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目的:本研究的目的即明确"长寿蛋白"Sirt1对FSGS模型中损伤足细胞"长寿"的影响并初步阐明Sirt1对足细胞的保护作用和分子机制.方法:体外培养人条件永生化足细胞,利用嘌呤霉素核苷酸(PA)损伤模型30ug/ml处理.分为三组:1)对照组;2)PA组;3)Sirt1活化剂处理组;分别检测足细胞PA处理前后形态改变,western-blot检测Cleaved Caspase 3、LC3II的蛋白表达,线粒体探针检测各组足细胞线粒体的数量以及线粒体ROS产量,Seahorse线粒体XF96分析仪检测各组足细胞线粒体3态呼吸耗氧率(OCR).结果:(1)PA 50ug/ml处理人足细胞24小时后Sift1蛋白和mRNA表达下降;2)PA作用后足细胞形态紊乱,足突消失,而Sirt1活化剂Resveratrol部分逆转足细胞的形态改变;3)PA作用足细胞后线粒体探针检测,PA作用后足细胞线粒体明显减少,ROS产量增加,而Sirt1活化剂Resveratrol处理后线粒体数量减少不明显,ROS产生下降;ROS的ELISA检测同样证明这点;4)Resveratrol逆转了PA作用足细胞后LC3II表达的下降;5)Resveratrol处理足细胞,PA作用后Cleaved Caspase3表达较未治疗组下降;6)Resveratrol处理足细胞后其线粒体3态呼吸OCR高于PA组.结论:"长寿蛋白"Sirt1对PA损伤足细胞有明显保护作用,该作用可能通过减少线粒体ROS产生,增加足细胞线粒体的数量,恢复足细胞的线粒体功能并部分逆转足细胞的自噬水平实现的,为以足细胞为靶点的FSGS的治疗策略提供理论基础,开辟新的思路,但是Sirt1作为细胞能量的调节中心环节,其对于足细胞的保护作用仍需要迸一步的研究.
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