利用RNAi技术研究小麦条锈菌候选关键蛋白激酶基因

来源 :中国植物病理学会2015年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuper
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  小麦条锈病是由条形柄锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)造成的气传真菌病害,是威胁全球小麦生产的最重要病害之一.近来,在植物病原真菌与寄主互作的信号转导途径等研究中发现,蛋白激酶在植物病原真菌的生长发育与致病过程中起着非常关键的作用.本实验借助已明确的禾谷镰刀菌中的关键蛋白激酶氨基酸序列和本实验室已测序的小麦条锈菌基因组数据库,通过blast分析鉴定并获得27个小麦条锈菌候选关键蛋白激酶基因;利用实时荧光定量技术分析基因表达特征,发现Ps23940、Ps18181、Ps19498、Ps19627、Ps9318、Ps23739与Ps26471在条锈菌侵染前期(0h-48h)诱导上调表达,Ps1134、Ps25317、Ps9666、Ps20225、Ps21460与Ps26267在侵染前期(0h-48h)具有较高的表达水平,Ps27645、Ps16944、Ps20880、Ps23097在条锈菌夏孢子阶段(US、0h)高表达,Ps19627、Ps9318、Ps21460、Ps23097与Ps23739基因在条锈菌产孢期(9d-11d)具有较高的表达水平;通过病毒介导的基因沉默技术(Virus Induced Gene Silencing,VIGS)对上述关键蛋白激酶进行功能分析,发现分别瞬时沉默Ps12169、Ps16944、Ps18693、Ps23739、Ps9666、Ps26267、Ps18181、Ps11901后均可导致条锈菌潜育期延长,菌落扩展受到抑制,产孢量明显下降;进一步利用RNAi干扰技术,构建了pAHC25-Ps26267和pAHC25-Ps23739干扰载体,通过基因枪轰击的方法转化小麦,分别得到pAHC25-Ps26267 T0代转基因植株83株,pAHC25-Ps23739 T0代转基因植株89株.本研究将为揭示小麦条锈菌致病分子机制,及建立小麦条锈病持久控制的新策略提供基因资源和奠定理论基础.
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